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目的:分析吸入麻醉药异氟烷催眠、镇痛作用与甘氨酸受体的关系。
方法:建立小鼠异氟烷腹腔和皮下注射的催眠、镇痛模型后,在小鼠催醒、甩尾、福尔马林实验中,观察工具药(甘氨酸受体激动剂、阻断剂等)对小鼠翻正反射消失持续时间、甩尾潜伏期、累计舔足时间的影响;应用免疫组化方法观察异氟烷对福尔马林小鼠脊髓Fos、一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase,NOS)表达的影响以及用工具药后的变化;应用分光光度法观察异氟烷对小鼠脊髓NOS活性和NO产量的影响以及用工具药后的变化。
结果:士的宁(士的宁敏感的甘氨酸受体特异阻断剂)缩短异氟烷小鼠的睡眠时间53%~58%(P<0.01),但睡眠时间仍在16min以上;D-丝氨酸(非士的宁敏感的甘氨酸受体激动剂)对异氟烷小鼠的睡眠时间无明显影响(P>0.05)。鞘内士的宁(1.25、2.5、5ng)、D-丝氨酸(0.025、0.05、0.1ng)拮抗甩尾法实验异氟烷的镇痛作用(P<0.05,P<0.01);鞘内牛磺酸(士的宁敏感的甘氨酸受体部分激动剂,0.25、0.5μg)、7-CKNA(非士的宁敏感的甘氨酸受体特异阻断剂,0.25、0.5μg)增强甩尾法实验异氟烷的镇痛作用(P<0.05,P<0.01)。鞘内士的宁(2.5、5、10ng)、牛磺酸(0.25、0.5μg)分别拮抗或增强福尔马林实验Ⅰ相和Ⅱ相异氟烷的镇痛作用(P<0.01,P<0.05);鞘内D-丝氨酸(0.05、0.1ng)、7-CKNA0.5μg分别拮抗或增强福尔马林实验Ⅰ相异氟烷的镇痛作用(P<0.05),对Ⅱ相无明显影响(P>0.05)。
免疫组织化学及分光光度法结果显示:鞘内士的宁0.25ng、D-丝氨酸0.5ng拮抗异氟烷对福尔马林小鼠脊髓FOS蛋白表达的抑制作用(P<0.01);鞘内牛磺酸0.5μg、7-CKNA0.5μg增强异氟烷对福尔马林小鼠脊髓FOS蛋白表达的抑制作用(P<0.01)。鞘内士的宁2.5ng、D-丝氨酸0.05ng拮抗异氟烷对小鼠脊髓NOS蛋白表达、NOS活性和NO产量的抑制作用(P<0.05,P<0.01);鞘内牛磺酸0.5μg、7-CKNA0.5μg增强异氟烷对小鼠脊髓NOS蛋白表达、NOS活性和NO产量的抑制作用(P<0.05,P<0.01)。
结论:脑内士的宁敏感的甘氨酸受体部分介导了异氟烷的催眠作用;脊髓甘氨酸受体参与介导异氟烷的镇痛作用,这可能与脊髓NOS活性和NO产量变化有关。