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研究一ZD55-Sur-EGFP对结肠癌生长影响的实验研究目的:研究ZD55-Sur-EGFP(携带Survivin shRNA的肿瘤增殖型腺病毒)对人结肠癌细胞株SW480和LoVo生长,增殖,凋亡的影响及在其在裸鼠皮下移植瘤中的作用,探讨其对结直肠癌的治疗效果。方法:使用ZD55-Sur-EGFP转染人结肠癌细胞株SW480和LoVo以及正常肠上皮细胞IEC。用RT-PCR和Western Blot检测转染后的肿瘤细胞中Survivin mRNA及蛋白的表达;用MTT细胞存活率实验、考马斯蓝染色细胞毒性实验和流式细胞仪检测细胞的死亡和凋亡情况;构建SW480细胞裸鼠皮下移植瘤模型,通过尾静脉注射ZD55-Sur-EGFP,观察其对肿瘤生长及Survivin蛋白表达的影响。结果: ZD55-Sur-EGFP能特异性地在结肠癌细胞株SW480与LoVo中增殖,并能显著降低细胞Survivin mRNA和蛋白的表达,与Ad-Sur-EGFP、ZD55-EGFP和Ad-EGFP组相比差异有统计学意义(P< 0.0001),且ZD55-Sur-EGFP组中肿瘤细胞的死亡率及凋亡率均显著高于其他组(P< 0.05);在裸鼠皮下移植瘤模型中,ZD55-Sur-EGFP能够显著降低移植瘤的体积,同时减少肿瘤组织内的Survivin蛋白表达,差异有统计学意义(P< 0.05)。结论:本研究提示,ZD55-Sur-EGFP病毒治疗有可能成为人结直肠癌有效的治疗方法,。研究二ZD55-Sur-EGFP联合5-FU对结肠癌淋巴转移影响的实验研究目的:研究ZD55-Sur-EGFP与5-FU合用在体外和裸鼠活体中对人结肠癌细胞株生长及侵袭能力的影响,探讨其对淋巴转移性结肠癌的治疗效果。方法:联合使用ZD55-Sur-EGFP与5-FU在转染人结肠癌细胞株SW480和LoVo。用Western Blot检测转染后的肿瘤细胞中Survivin蛋白的表达,用MTT法检测联合使用二者对肿瘤细胞增殖的影响;使用transwell实验检测联合使用ZD55-Sur-EGFP与5-FU对肿瘤迁移和侵袭能力的影响;构建SW480细胞裸鼠足垫移植瘤模型,在足垫移植瘤模型中观察联合使用ZD55-Sur-EGFP和5-FU对肿瘤生长及淋巴结转移的影响。结果:同时使用低剂量的ZD55-Sur-EGFP与5-FU对SW480和LoVo细胞Survivin蛋白的表达相比单独使用ZD55-Sur-EGFP没有明显变化,但能够显著抑制肿瘤细胞的增殖(P<0.05),并且在体外能有效抑制结肠癌细胞株的迁移和侵袭能力(P<0.05);在裸鼠模型中,联合使用ZD55-Sur-EGFP与5-FU相比单独使用两者可以更明显抑制肿瘤的生长(P<0.05),且可以明显抑制肿瘤的淋巴结转移(P<0.0001)。结论:本研究提示,ZD55-Sur-EGFP联合5-FU能有效降低结肠癌细胞的生长、转移及侵袭能力,因此可能成为抑制结直肠癌淋巴转移的有效手段。