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目的研究抑制UVRAG基因介导的自噬在DADS诱导白血病K562细胞凋亡的变化,初步探讨DADS诱导K562细胞发生凋亡及自噬之间的相互关系。方法1)K562细胞培养体系进行细胞培养。不同浓度20mg/L、40mg/L、80mg/LDADS作用K562细胞12小时后提取细胞蛋白,采用蛋白印迹技术(Western Blotting)检测凋亡相关基因caspase-3的表达。2)将构建成功并筛选出最有效干扰抑制UVRAG基因的siRNA序列片段采用lipofectamine TM2000脂质体转染法转染白血病K562细胞24小时,利用QT-PCR检测UVRAG mRNA的表达水平以此观察干扰效果。3)将转染成功的白血病K562细胞以40mg/LDADS处理12小时,采用蛋白印迹技术检测凋亡相关基因caspase-3的表达。结果1.以不同浓度的DADS(20、40、80mg/L)处理K562细胞12h后,通过westernbloting检测到:与空白组相比,DADS药物处理组凋亡相关基因caspase-3的蛋白表达量呈增多的趋势(P<0.05),但药物处理组之间的差异不明显(P>0.05)。2.QT-PCR显示:与空白组、阴性对照组及阳性对照组相比,沉默UVRAG基因后mRNA的产物明显下降,证实了沉默UVRAG基因的小干扰实验成功,而40mg/LDADS药物处理小干扰后的K562细胞12h,mRNA的产物下降更明显。3.将40mg/LDADS处理小干扰成功的K562细胞12小时提取细胞蛋白,通过westernbloting检测到:与空白组相比,沉默UVRAG后K562细胞中凋亡相关基因caspase-3的蛋白表达量明显减少(P<0.05)。结论1.提示了DADS所诱导的细胞自噬依赖于细胞内固有的UVRAG基因的表达水平。2.抑制UVRAG介导的自噬可能也抑制DADS诱导K562细胞发生凋亡。