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牙周炎是一种影响全世界大多数人口的慢性炎症性疾病,目前我们可以通过洁治术、龈下刮治术、根面平整术等有效控制牙周炎的继续发展,但已经缺失的牙槽骨却无法恢复,因牙槽骨缺失导致的牙齿松动也无法解决;而目前的再生方法如GTR,其效果并不理想,根据个体差异较大;通过PDLSCs再生牙周组织从而恢复缺失的牙周组织是目前组织工程研究的热点。在牙周炎症条件下,牙周组织的氧水平降低,低氧影响牙周组织炎症引发的PDLSCs的能力;而在正常牙周组织中低氧对PDLSCs的影响鲜有研究。在这项研究中,我们试图阐明低氧影响PDLSCs中RUNX2,这一成骨细胞分化关键因子的表达,以及可能的影响机制。我们发现,PDLSCs中HIF-1α、VEGF、RUNX2在低氧处理后表达增强。为了进一步明确低氧对这三个因子的影响机制,我们采用CoCl2,HIF-1α激动剂以及YC-1,HIF-1α拮抗剂,检测HIF-1α、VEGF和RUNX2表达情况。此外,低氧下外源性添加h VEGF及采用VEGF siRNA干扰后检测RUNX2表达情况。结果发现,在牙周组织再生研究中,PDLSCs中低氧可以通过HIF-1α介导VEGF的表达,从而影响Runx2的表达。材料和方法通过组织块法联合酶消化法获取PDLCs,并通过观察其生长方式及克隆形成获得纯化细胞;流式细胞仪检测MSC表面标记物鉴定其来源;并通过成骨成脂诱导茜素红染色、油红0染色检测其多向分化能力;低氧3%O2采用western blot及细胞免疫荧光染色检测HIF-1α、VEGF、RUNX2表达情况;采用MTT法确定CoCl2和YC-1的最适细胞浓度,在常氧下通过HIF-1α激动剂CoCl2及低氧下使用HIF-1α拮抗剂YC-1分别促进和抑制HIF-1α表达,检测VEGF、RUNX2蛋白表达情况;低氧3%O2外源性添加h VEGF重组蛋白,western blot检测RUNX2表达情况,低氧3%O2采用VEGF si RNA干扰,采用qPCR和western blot检测VEGF和RUNX2基因和蛋白表达情况。结果通过PDLSCs原代培养,观察其生长方式,并通过克隆提纯后我们获得了稳定来源的PDLSCs,通过检测间充质表面标记物的表达,发现其间充质表面标记物表达阳性,排除了造血系统的污染,我们进一步确定其来源,通过成骨诱导茜素红染色可见矿化结节形成,成脂诱导油红0染色可见红色脂滴形成;western blot检测低氧(3%O2)下HIF-1α、VEGF、RUNX2表达发现,低氧促进了HIF-1α、VEGF、RUNX2蛋白表达(p<0.05),细胞免疫荧光染色与western blot一致,低氧下HIF-1α、VEGF、RUNX2荧光表达增强;MTT法检测Co Cl2和YC-1适宜细胞浓度分别为100μM和10nM,Co Cl2组HIF-1α、VEGF、RUNX2表达增强,YC-1组HIF-1α、VEGF、RUNX2表达与低氧组比较减少;低氧3%O2外源性添加hVEGF重组蛋白,发现hVEGF组促进了蛋白RUNX2表达,采用VEGF si RNA干扰后q PCR及western blot检测VEGF蛋白及基因表达表明siRNA干扰成功,si RNA干扰组RUNX2表达减少。结论在PDLSCs中,低氧可能通过HIF-1α影响VEGF表达,进而影响RUNX2的表达。