鼻息肉中iNOS、Bax及Bcl-2的表达及相关性研究

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目的:   鼻息肉是鼻科常见病,具有易复发的特点,在鼻科疾病中占有重要的地位,鼻息肉致病因素多,发病机制复杂,是多因素综合作用下所形成的鼻腔黏膜慢性持续性炎症过程。一氧化氮(NO)是一种内源性的活性气体递质,它属于神经递质类的富于反应性的极小气体分子,NO结构简单、难溶于水、具有自由基的性质,NO在血管紧张性调节、宿主免疫、炎症和神经信息传递中起着重要的作用,NO是由一氧化氮合酶(NOS)催化左旋精氨酸而生成的,NOS在目前被分为3种亚型:Ⅰ型为神经元型(nNOS或,NOSl);Ⅱ型为诱导型(iNOS或NOS2);Ⅲ型为内皮型(eNOS或NOS3)。Ⅰ型和珊型是结构型(cNOS),它催化生成的NO量很少、释放迅速、持续时间较短,它主要在生理情况下起作用;Ⅱ型NOS催化生成的NO量大、持续时间较长,主要在病理情况下起作用。Bcl-2基因家庭是细胞凋亡的重要调控基因,Bcl-2和Bax是一对最为熟知的抑凋亡与凋亡基因。目前,iNOS、Bcl-2和Bax在鼻息肉中的表达均有报道,但表达结果差异较大,而且三者在鼻息肉中表达的相关性未见报道。本研究旨在检测iNOS,Bax,Bcl-2的表达及相关关系,探讨iNOSX寸凋亡的影响及三者在鼻息肉发生发展中的作用。   方法:   取自临床30例鼻息肉手术患者的部分息肉组织,每例标本取大小相近(约1cm*1cm*1cm)的4块组织,分别用于形态学观察和三种实验方法,其中用于免疫组织化学实验的组织块足够大以备切片充分,每块组织用锡纸包装做好标记速冻待检,应用原位末端标记(TUNEL)法检测鼻息肉组织凋亡情况,定性分析;免疫组织化学SABC法检测iNOS及Bax,Bcl-2的表达,定性分析;WesternBlot方法进一步检测iNOS,Bax,Bcl-2三种蛋白的表达水平,半定量分析,统计分析探讨三种蛋白的相关性。   结果:   1、TUNEL方法检测凋亡基因位于鼻息肉表层上皮细胞及腺体上皮细胞,30例组织均有表达,但表达强弱不一。   2、免疫组化检测30例组织iNOS及Bax,Bcl-2均表达于鼻息肉组织上皮细胞,腺上皮细胞,血管内皮细胞和浸润的炎性细胞,阳性定位于细胞质,其中Bax表达为弱阳性,iNOS、Bcl-2表达为强阳性。   3、WesternBlot检测三种蛋白均有表达,且iNOS和Bcl-2两种蛋白表达水平高,Bax表达水平低,图像分析软件处理其相对灰度值,经统计学处理,三种抗体表达差异有统计学意义(P<0.01),iNOS与Bcl-2的表达具有正相关性(r=0.851,p<0.01);iNOS与Bax的表达具有负相关性(r=-0.714,P<0.01)。   结论:   1、鼻息肉组织中存在抑凋亡和促凋亡两种蛋白,并表达iNOS。   2、iNOS可能通过促进Bcl-2的作用抑制细胞凋亡,对鼻息肉的发生发展起着重要的促进作用,但具体机制还需进一步研究。
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