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目的:探索新药PI3K-p110σ抑制剂CAL-101联合硼替佐米(Bortezomib,BTZ)对人套细胞淋巴瘤(mantle celllymphoma,MCL)细胞株增殖和凋亡的影响,并研究联合作用的可能机制,以期为新药CAL-101在套细胞淋巴瘤的临床应用提供理论基础。方法:1.用不同浓度的CAL-101(10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、100μmol/L)和BTZ(0.02、0.04、0.08、0.16、0.32μmol/L)分别处理套细胞淋巴瘤细胞株HBL-2、Jeko-1和Z138细胞24、48、72小时,用四甲基偶氮唑(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)法计算出细胞增值抑制率;2.应用SPSS13.0软件分别计算两药的IC50值;3.设计协同实验:将细胞分为对照组(未加任何药物)、CAL-101组(加入20%、40%、60%、80%和100%CAL-101的IC50值)、BTZ组(20%、40%、60%、80%和100%BTZ的IC50)和CAL-101+BTZ组(CAL-101和BTZ的浓度同单药组),分别处理三种套细胞淋巴瘤细胞株HBL-2、Jeko-1和Z138细胞48小时;4.应用协同分析软件CalcuSyn software(Biosoft,Ferguson,MO,美国)软件分析协同指数(CI);5.Western Blot检测蛋白PI3K-p110σ在3种细胞株的表达情况;6.Western Blot检测不同浓度的CAL-101处理3种细胞株后AKT、ERK、p-AKT、p-ERK的变化;7.用anexinV-FITC/PI流式细胞术检测这4组的细胞凋亡率;8.并用TransaM NF-κB p65转录因子试剂盒检测这4组的NF-κB p65的活性;9.Western Blot检测p-AKT及Caspase-3蛋白的表达水平。结果:1.单药CAL-101可抑制Z138、HBL-2和Jeko-1细胞增殖:10μmol/L、20μmol/l、40μmol/l、80μmol/l、100μmol/l的cal-101作用于z138细胞48小时的抑制率分别为:(17±1.2)%、(27±3.6)%、(41±3.6)%、(55±0.2)%、(62±3.5)%,作用于hbl-2的48小时抑制率为:(20±0.4)%、(35±0.2)%、(43±0.3)%、(53±0.6)%、(59±0.2)%,作用于jeko-1的48小时抑制率为(15±1.4)%、(27±2.7)%、(38±3.8)%、(47±0.7)%、(59±0.1)%;2.单药cal-101处理z138、hbl-2和jeko-1的48小时的ic50分别:56.957±0.6364、62.99±0.57003、77.82±0.65339,btz单药作用于z138、hbl-2和jeko-1细胞48h的ic50分别为:(0.7±0.8)μmol/l、(1.4±0.3)μmol/l和(1.5±0.4)μmol/l;3.协同实验:cal-101组(加入18、36、54、72和90μmol/lcal-101)、btz组(加入0.06、0.12、0.18、0.24和0.30μmol/lbtz)和cal-101+btz组(cal-101和btz的浓度同单药组)处理3种mcl细胞株。80%ic50值处理z138细胞48小时后,此三组的增殖抑制率分别为:(38.5±1.4)%、(35.6±5.1)%、(58.1±6.1)%;对hbl-2细胞的增殖抑制率分别为(42.3±1.2)%、(35.7±1.6)%、(67.3±3.3)%;对jeko-1细胞的增殖抑制率分别为(33.2±1.2)%、(36.0±1.1)%、(56.5±2.9)%;4.calcusynsoftware软件分析结果为cal-101联合btz两药有协同抑制增值作用(ci<1);5.westernblot检测发现hbl-2、jeko-1、z138细胞均表达pi3k-p110σ;6.不同浓度的cal-101处理z138、hbl-2、jeko-1细胞后p-akt、p-erk蛋白表达量随药物浓度的增加而降低,akt、erk无明显变化;7.cal-101联合btz的可协同促进mcl细胞的凋亡:经药物处理48h后,对照组、cal-101组、btz组和cal-101+btz组对z138细胞的凋亡率为:(2.6±1.8)%、(40.0±3.0)%、(34.0±1.0)%和(67.4±1.0)%,经药物处理96h后,此四组对hbl-2细胞的凋亡率分别为(7.4±0.6)%、(30.7±5.7)%、(12.0±1.0)%和(85.0±4.0)%,(p<0.01);8.cal-101联合btz能进一步抑制nf-κb的活性:z138细胞经对照组、cal-101组、btz组和cal-101+btz组处理后nf-κb蛋白的表达量分别为1.0、(43.3±1.2)%、(43.2±1.2)%、(22.2±0.6)%;hbl-2细胞经四组处理后nf-κb蛋白的表达量分别为1.0、(35.7±0.4)%、(36.8±1.0)%、(23.1±1.3)%;jeko-1细胞经四组处理后nf-κb蛋白的表达量分别为1.0、(46.1±1.0)%、(54.2±0.5)%、(22.5±0.5)%(P<0.05);9.Western Blot证实:CAL-101联合BTZ可显著抑制AKT磷酸化(P<0.05);CAL-101联合BTZ可使凋亡蛋白Casepase-3裂解片段表达水平升高(P<0.05)。结论:PI3K/AKT和ERK信号通路在MCL肿瘤细胞中被异常激活,从而使肿瘤细胞获得无限增殖、侵袭和耐药的能力。因此抑制PI3K/AKT和ERK信号通路中的关键蛋白分子的活性,关闭或减弱此信号通路的传导,最终可抑制肿瘤细胞的无限增殖、侵袭和耐药的能力。本研究证实CAL-101对套细胞淋巴瘤有毒性作用,当联合BTZ时细胞毒性作用增强,可能是CAL-101可通过抑制PI3K/AKT信号通路的活化,增强了肿瘤细胞对BTZ的敏感性,另一方面,PI3K/AKT、NF-κB信号通路关闭或消弱后,裂解的Caspase-3表达量上调,促进肿瘤细胞凋亡,抑制增殖。当然,这种联合作用还有待于今后临床实验的进一步证实。