金钗石斛是我国的传统名贵中药,具有增强免疫、保护胃肠道、降血糖、降血脂、等多种功效。本研究以金钗石斛提取物为主要原料,选取枸杞和葛根提取物与之配伍形成复方,通过均匀设计实验对复方进行优化,并研究优化后复方的配伍效果,在此基础上研发一款稳定的复方保健口服液,并评价其增强免疫和护胃功效。研究内容如下:1.进行原料筛选和复方优化。以RAW264.7巨噬细胞吞噬能力和乙醇损伤的人胃上皮细胞(GES-1)增殖率为指标,筛选出金钗石斛提取物、枸杞提取物及葛根提取物为复方原料。通过均匀设计优化复方,得到复方比例为金钗石斛提取物:枸杞提取物:葛根提取物=5:3:3。2.体外测定金钗石斛、葛根、枸杞提取物及复方的免疫和护胃功效。通过小鼠脾淋巴细胞增殖率、RAW264.7细胞吞噬指数、一氧化氮(NO)水平和GES-1细胞增殖率等指标,探究复方配伍作用。给药浓度为1000 μg/mL,复方显著促进淋巴细胞增殖,且效果优于金钗石斛和枸杞提取物;浓度为200μg/mL,复方显著提高RAW264.7细胞吞噬能力,吞噬指数为1.96±0.01,高于各单一提取物;浓度为400 μg/mL时,单一及复方提取物处理的RAW264.7细胞,NO分泌能力均显著增强,复方对应的NO水平最高;400 μg/mL浓度,与模型组相比,单一及复方提取物均能缓解乙醇所致的GES-1细胞活力损伤,复方组GES-1细胞增殖率为86.75%±4.56%,高于单一提取物处理组。复方提取物具有增强免疫和护胃功效,且效果优于单一提取物,表现出协同作用。3.对口服液进行辅料优化、理化指标测定及稳定性研究。得到辅料配方为黄原胶3.0mg/mL、罗汉果甜苷2.0mg/mL。口服液pH为4.0,可溶性固形物含量为6.6%,多糖、葛根素含量为13.97 mg/mL、3.88 mg/mL。口服液在为期3个月的加速稳定性实验期间,感官品质、理化指标、微生物指标均符合产品质量要求,主要功效成分多糖及葛根素的稳定性良好,满足24个月货架期的要求。4.通过BALB/c小鼠评价口服液的免疫调节活性。与空白组相比,口服液高剂量组小鼠脾脏指数和胸腺指数显著升高,为4.46±0.63、3.61±0.45;口服液低、中、高剂量组小鼠脾淋巴细胞增殖能力均显著提高;高剂量口服液小鼠的吞噬指数明显提高至5.28±0.43;低、中和高剂量口服液预处理组小鼠的溶血空斑数值显著高于空白组。本款口服液可以同时增强小鼠特异性和非特异性免疫,具有良好的免疫调节功效。5.通过乙醇诱导的大鼠胃黏膜损伤模型评价口服液的护胃功效。口服液剂量增加,乙醇诱导的大鼠胃黏膜损伤情况逐渐变轻,充血条带、溃疡面积等变小,上皮黏膜层脱落情况减轻,出血范围、炎症细胞数目等均减少。高剂量组胃黏膜损伤分数为15.5±4.18,显著低于乙醇损伤模型组。同时中、高剂量口服液能有效保持超氧化物歧化酶(SOD)的活性水平,同时降低丙二醛(MDA)含量,抑制胃黏膜攻击因子氧自由基的大量释放,并降低炎症因子TNF-α和IL-1β含量,提高表皮生长因子(EGF)和前列腺素E2(PGE2)含量。研究证实了本款口服液对乙醇诱导的胃黏膜损伤具有辅助保护作用。