论文部分内容阅读
[目的] 研究PI3K、AKT、p-AKT及eNOS在薄型子宫内膜组织中的mRNA和蛋白质的表达情况，探索PI3K/AKT-eNOS信号通路在薄型子宫内膜中作用。 [方法] 1.收集2013年8月至2015年1月深圳市南山区人民医院妇科病历资料完整患者的临床子宫内膜标本共40例，其中正常内膜组20例，患者均为不孕症拟行宫腔镜检查及治疗。薄型内膜组20例，因月经过少就诊拟行宫腔镜检查及治疗的患者。所有的患者均采用美国史赛克公司5.07 mm连续灌流宫腔镜，术中取子宫内膜组织约0.5g～1.0g，暂存于液氮后再转入-80℃冰箱中保存备用。 2.将收集到的子宫内膜组织采用实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应(Real-time Quantitative RT-PCR)法检测-80℃冻存的新鲜组织中PI3K（磷脂酰肌醇-3-激酶）、AKT（蛋白激酶）及eNOS（内皮型一氧化氮合酶）的mRNA基因的表达，免疫组化S-P法对PI3K、AKT、p-AKT（磷酸化蛋白激酶）及eNOS的蛋白质表达进行定位及半定量检测，同时采用Western Blot蛋白印迹法对两组子宫内膜组织PI3K、AKT、p-AKT及eNOS蛋白质进行定量检测，分析正常内膜组及薄型内膜组中表达差异情况。 3.统计学处理应用SPSS(17.0 FOR WINDROWS)软件包进行数据处理，组间比较采用两独立样本t检验，相关性分析采用Spearman等级相关性分析。P＜0.05为差异有统计学意义。 [结果] 1.子宫内膜组织中PI3K蛋白的表达主要定位于子宫内膜腺上皮细胞、腔上皮细胞及间质细胞的细胞膜中;极少部分定位于细胞核。且PI3K mRNA和蛋白质的表达量在薄型内膜组的增殖期中明显降低，两组差异有统计学意义(P＜0.05)。 2.子宫内膜组织AKT蛋白的表达主要位于子宫内膜的间质细胞胞浆中，腺上皮胞浆也有少量表达;部分细胞核为阳性表达。且AKT mRNA及其蛋白质的表达量在薄型子宫内膜组的增殖期明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。 3.子宫内膜组织p-AKT蛋白的表达主要定位于子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞胞浆中;部分定位于胞核，呈核浆型表达，且p-AKT蛋白质的表达量在薄型子宫内膜组增殖期明显降低，两组对比差异有统计学意义(P＜0.05)。 4.子宫内膜组织中eNOS的表达主要位于腺上皮、间质血管内皮、腔上皮以及子宫内膜细胞中间质细胞的细胞浆，胞核不着色，eNOS mRNA和蛋白质的表达量在正常子宫内膜组比薄型内膜组稍高，两组对比差异无统计学意义（P＞0.05）。 [结论] 1.PI3K、AKT、p-AKT及eNOS mRNA和蛋白质在正常子宫内膜及部分的薄型子宫内膜组织的增殖期均有表达。PI3K及eNOS在免疫组化染色中主要定位于子宫内膜细胞的细胞浆，而AKT及p-AKT呈核浆型表达。 2.PI3K、AKT及p-AKT在薄型子宫内膜组织增殖期中表达水平下降。 3.PI3K、AKT及p-AKT在正常内膜组织及薄型子宫内膜组织中的蛋白质表达水平呈现正相关，提示薄型子宫内膜的发生及发展可能与PI3K/AKT信号通路有关。