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背景:近来研究表明,过敏性哮喘的发生与遗传、生活方式及所处环境相关。在众多因素中,吸入性过敏原是主要的诱因,而且具有区域差异性。研究发现,在我国尘螨(Dust mite)是诱发过敏性哮喘的主要因素,如粉尘螨(Dermatophagoides farina)其分泌物、尸体分解物和排泄物等都能诱发过敏性疾病(荨麻疹、过敏性鼻炎、哮喘、皮炎等)。有60%成年人哮喘患者对尘螨过敏,在儿童中比例更高,约80%的儿童哮喘患者对尘螨过敏。当过敏原通过呼吸道进入肺部后,肺上皮细胞产生胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、IL-33,它们可以上调二型固有淋巴细胞(ILC2s),研究发现ILC2s与过敏性疾病有着密切的关系。目的:在前期研究中,已成功鉴定出Derf31是粉尘螨新过敏原。本研究通过纯化柱富集Derf31蛋白,从细胞实验和动物实验两部分探讨Derf31诱发过敏性哮喘的机制。方法:(1)利用原核表达系统经Ni柱纯化后获得较为纯净的Derf31和Der f 1蛋白。(2)细胞实验:Derf31与DC2.4孵育流式检测表面分子表达情况;Derf31与BMDC、脾细胞共孵育检测IL-4、IFN-γ分泌水平,CFSE法检测细胞增殖情况;TSLP通路检测:Derf31分别与正常小鼠肺组织细胞、A549共孵育,分别加入TLR2抗体、TLR4抑制剂刺激后检测IL-33、TSLP表达水平。(3)动物实验:利用Derf31、Der f 1过敏原分别构建过敏性哮喘模型,通过血清特异性抗体、细胞因子、肺部病理切片染色等验证模型是否成功;通过ELISA法检测肺部灌洗液、组织匀浆上清中的IL-33和TSLP含量,Siglec-F、CD11c流式抗体标记肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞,流式细胞术检测其含量;用PE-CD90、PerCP-IL-33R、FITC-Lineage和APC-CD45抗体标记并检测肺部组织ILC2细胞,同时抽取肺组织总RNA,RT-PCR检测IL-33、TSLP和IL-13的含量。结果:通过原核表达系统成功获得较高浓度的Der f 1和Derf31蛋白。Derf31能够增强DC细胞表面分子CD40、CD83和CD80的表达,同时促进Th2细胞的极化与增殖。在Derf31与肺上皮细胞共孵育体系中加入TLR2抗体后,TSLP、IL-33水平明显下降,但加入TLR4抑制剂并没有影响。Derf31可成功诱发小鼠过敏性哮喘,并且Derf31组与Der f 1组比较,其嗜酸性粒细胞、IL-33和TSLP水平显著升高;同时与空白组对比ILC2细胞表达明显增加。结论:通过本研究发现,Derf31可上调DC细胞表面的共刺激因子并促使Th0向Th2偏移;Derf31可通过TLR2调节肺部上皮细胞TSLP、IL-33的表达;在动物实验中,Derf31可诱导明显的嗜酸性粒细胞型过敏性哮喘,而且使ILC2细胞表达增加。