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目的研究乙型肝炎病毒HBx蛋白对索拉非尼诱导的肝癌HepG2细胞凋亡的影响。方法通过Trans109化学感受态细胞转化,将空载质粒pEGFP-N1、构建好的含全长HBx重组目的质粒pEGFP-N1-HBx扩增,小量提取质粒以PCR验证质粒扩增成功,大量抽提质粒备用,并用脂质体转染法转染HepG2细胞,采用G418筛选出抗性克隆,反复传代,荧光显微镜下观察,并以有限稀释法筛选出阳性克隆,扩大培养。取各组细胞抽提RNA,以β-actin为内参,用RT-PCR方法检测细胞RNA中HBx基因表达情况以表明建立稳定表达GFP、GFP-HBx的HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx细胞株。用索拉非尼(5μmol/1)分别处理未予转染的HepG2细胞、HepG2/GFP细胞、HepG2/GFP-HBx细胞,在显微镜下观察处理后24h、48h、72h后细胞形态变化,并用CCK-8法计算各时间点细胞抑制率；以及流式细胞学检测索拉非尼处理各时间点各组细胞凋亡率。结果重组目的质粒pEGFP-N1-HBx经PCR验证扩增成功。荧光显微镜观察,转染的HepG2/GFP细胞、HepG2/GFP-HBx细胞传70代后,仍表达强的GFP,RT-PCR检测显示在HepG2/GFP-HBx细胞RNA中存在HBx基因的转录表达,表明稳定表达GFP-HBx的HepG2细胞株成功建立。CCK-8法结果显示索拉非尼处理的HepG2细胞、HepG2/GFP细胞、HepG2/GFP-HBx细胞均发生了明显的时间依赖性细胞死亡。流式细胞仪检测结果显示索拉非尼(5μmol/1)处理的HepG2细胞、HepG2/GFP细胞、HepG2/GFP-HBx细胞的凋亡率呈明显的时间依赖性,索拉非尼处理24h、48h、72h后,HepG2细胞、HepG2/GFP细胞凋亡率均明显高于HepG2/GFP-HBx细胞,差别均有统计学意义(P<0.01)。而未处理组细胞凋亡率为3.72%、4.40%、3.85%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论本实验成功建立了稳定表达GFP、GFP-HBx的肝癌HepG2细胞株；索拉非尼处理的HepG2细胞、HepG2/GFP细胞、HepG2/GFP-HBx细胞均发生了明显的时间依赖性细胞死亡；HBx能够抑制索拉非尼诱导的HepG2细胞凋亡。