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精子特异蛋白Izumo定位在顶体内膜上,在精子发生顶体反应后暴露于表面。Izumo基因敲除后的雄性小鼠其精子形态和运动仍然正常,能穿过小鼠卵透明带但是无法穿过卵膜,因而完全丧失受精能力。这些结果提示Izumo在精-卵融合的过程中起关键作用。
本研究将小鼠Izumo蛋白分成3段(PA、PB、PC)进行克隆表达,其中PB包含Ig-like结构域的全部氨基酸序列;用纯化的各重组Izumo分段蛋白分别免疫兔,获取了特异的、高效价的多克隆抗体;通过小鼠体外精-卵融合实验和小鼠交配实验,发现小鼠Izumo蛋白的Ig-like结构域有较明显的抗生育作用,可作为免疫节育靶抗原的候选者。通过搜索Swiss-Prot蛋白数据库,发现溶脲脲原体(UU)与人精子蛋白Izumo之间有交叉反应抗原。然后通过Western blot鉴定了ATLTK这五肽为UU474蛋白与人Izumo蛋白Ig-like结构域之间的交叉反应抗原;通过小鼠体外精-卵融合实验和小鼠交配实验,发现合成肽Izumo212-227(包含ATLTK,位于Ig-like结构域)也有较明显的抗生育作用。推测Izumo212-227可能是Izumo蛋白Ig-like结构域上B细胞表位中的一个。由于人与小鼠Izumo蛋白Ig-like结构域的氨基酸序列保守性很高,同时已经制备了高效价的抗小鼠Izumo蛋白Ig-like结构域(PB)的抗体,因此我们通过Western blot来初步筛选小鼠Izumo蛋白Ig-like结构域的线性B细胞表位,这些B细胞表位有望成为将来多价嵌合肽节育疫苗中的重要成份。本研究的结果提示,精子特异蛋白Izumo的Ig-like结构域在受精过程中可能起了重要作用,可以作为免疫节育疫苗的候选靶抗原。本研究还鉴定了Izumo的Ig-like结构域与UU474蛋白之间存在交叉反应抗原,为阐明UU感染导致抗精子抗体产生的机制提供了新的线索。