胰腺癌是目前全球最常见的消化道癌症之一,也是一种恶性程度极高的致命疾病,中位生存期约3-6个月,5年生存率不到百分之5。目前针对胰腺癌最好的治疗方法仍未手术治疗,但基于胰腺癌临床特征,往往发现时已错过最佳的手术时期,同时放化疗对于胰腺癌治疗欠佳,从而导致胰腺癌的预后极差。为此,进一步探寻和了解胰腺癌发生发展的分子机制,同时探索新的治疗方向和靶点对于提高胰腺癌的预后至关重要。外泌体是一种有细胞分泌的由双层膜构成的直径为30-100nm的小囊泡,其内部包含有蛋白质、核酸、脂质等,参与细胞通讯、免疫应答等过程中,近年来发现其与胰腺癌的发生发展有着密切的联系,通过涉及影响细胞间信息传递,参与到调控肿瘤微环境、影响肿瘤细胞耐药、调节EMT等过程。缺氧微环境目前被证明是大多实体肿瘤的特征之一,在肿瘤的发生和发展中起到重要作用。局部微环境的缺氧通过改变细胞的代谢,促进了肿瘤细胞的增殖、侵袭及转移等恶性生物学行为。目的:提取并鉴定胰腺癌缺氧及常氧下外泌体浓度及蛋白水平的差异性,明确胰腺癌在不同微环境诱导所分泌的外泌体对于血管内皮细胞增殖迁移的影响,明确胰腺癌在不同环境诱导所分泌的外泌体对于血管生成的作用影响并探寻其潜在的机制。为胰腺癌肿瘤血管生成的研究提供依据以及为抗血管生成治疗肿瘤提供新方向。方法:1、胰腺癌PaTu-8988细胞在相同细胞密度情况下于去除外泌体血清培养液分别在低氧(94%N2、5%CO2、1%O2)及常氧条件培养48 h,收集细胞培养上清液,通过条件培养基提取的外泌体;2、采用蛋白质印迹法、透射电子显微镜、Nanosight纳米粒径检测仪进行外泌体鉴定及分析;3、CCK-8实验检测不同来源外泌体影响下HUVECs细胞增殖能力;4、Transwell实验、细胞划痕检测不同影响条件下HUVECs细胞迁移能力;5、血管形成实验检测不同影响条件下HUVECs细胞的血管形成能力;6、蛋白质印迹法检测VEGF-A蛋白水平表达以及AKT/m-TOR信号通路激活情况。结果:1、富集提取的胰腺癌PaTu-8988细胞外泌体大小为30~100 nm,表达CD9,CD63,CD81等外泌体表面标志物,相对于常氧环境,缺氧诱导的胰腺癌细胞分泌更多的外泌体。2、胰腺癌PaTu-8988细胞外泌体促进了血管内皮细胞的增殖、迁移能力,缺氧诱导的胰腺癌PaTu-8988细胞外泌体具有更强的促进作用;3、胰腺癌PaTu-8988细胞外泌体促进了肿瘤血管生成能力,缺氧诱导的胰腺癌PaTu-8988细胞外泌体具有更强的促进作用;4、蛋白质印迹法结果显示胰腺癌PaTu-8988细胞外泌体可促进HUVECs细胞内VEGF-A蛋白表达水平上调,AKT、m-TOR的磷酸化改变,其中缺氧诱导的胰腺癌PaTu-8988细胞外泌体有更强大的促进作用。结论:1、缺氧诱导的胰腺癌细胞相对常氧环境所分泌的外泌体浓度更高,蛋白表达更多;2、缺氧诱导的胰腺癌细胞可通过外泌体促进HUVECs细胞增殖、迁移及血管形成;3、缺氧诱导的胰腺癌外泌体可能通过激活AKT/m-TOR的磷酸化,上调VEGF-A的蛋白表达促进肿瘤的血管生成。