钴60-γ射线致小鼠睾丸支持细胞结构及功能的损害

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研究背景及目的:随着工业化进程的加速,日常生活中环境辐射日益加剧,人们对放射性损伤也越来越重视。放射线可损伤全身多个系统,其中性腺组织对放射线极为敏感。支持细胞(Sertoli cells)作为睾丸生精上皮中唯一的非生殖细胞,是维持生精小管内生精环境稳定的重要细胞。因而,任何因素导致睾丸支持细胞结构及功能的损伤都有可能影响精子的形成,甚至导致男性不育。本课题拟通过不同剂量的钴60(60Co)-γ射线局部照射小鼠睾丸,并观察相应指标的变化,以明确不同剂量60Co-γ射线致小鼠睾丸支持细胞结构及功能急性损伤的程度,并初步探讨引起这种损伤的机制。方法:48只健康雄性KM小鼠,采用随机数字表法平均分为4组(n=12):正常对照组(A组);60Co-γ射线双侧睾丸局部照射组有3个剂量组:剂量2Gy(B组);剂量6Gy(C组);剂量10Gy(D组),局部均匀照射下腹部,时间设定为517秒。照射完成48h后,处死小鼠,测定实验小鼠身体及双睾丸重量并采集血液3ml;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中生殖激素,即:促黄体生成素(luteinizing hormone, LH)、卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone, FSH)以及抑制素β (Inhibin0)水平;应用光学显微镜观察小鼠睾丸组织形态学变化;应用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测实验小鼠睾丸组织中抑制素β mRNA的相对表达量;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测实验小鼠睾丸组织中抗氧化指标,即:还原性谷胱甘肽(Glutathione, GSH)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(Malondialdehyde, MDA)含量。结果:60Co-γ射线照射组(B、C、D组)较正常组(A组)睾丸重量下降(P<0.05),以C、D两组更为明显(P<0.01);血清生殖激素FSH水平明显上升(P<0.05),而抑制素p水平明显下降(P<0.05);光镜下可见小鼠睾丸生精细胞及支持细胞均发生不同程度的损伤,其中以D组损伤程度最为明显;睾丸组织抑制素βmRNA表达水平明显下降,差异均有统计学意义(allP<0.05);睾丸组织SOD含量呈下降趋势(P<0.05),其中C、D两组下降较为明显(allP<0.05);GSH含量亦呈下降趋势,差异均有统计学意义(allP<0.05), MDA含量呈上升趋势,差异均有统计学意义(allP<0.05)。结论:60Co-γ射线对睾丸支持细胞结构及功能有明显损伤作用,且损伤程度与照射剂量呈正相关性;损伤的机制与射线致睾丸抗氧化系统受损,引起睾丸组织氧化-抗氧化系统失衡导致氧化应激损伤作用有关。
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