论文部分内容阅读
前言 随着胰肾联合移植临床的广泛应用，移植胰腺的再灌注损伤逐渐受到重视。有些时候，缺血后再灌注，不仅不能使组织，器官功能恢复，反而加重组织器官的功能障碍和结构损伤。这种现象称为缺血-再灌注损伤（Ischemia-reperfusion Injury I／R）。现在认为再灌注损伤是一个多因素互相影响的网络化的病理生理过程。大量的研究表明，缺血过程中大量的腺苷聚集与再灌注损伤有关，提示腺苷在组织的再灌注损伤中起着重要的作用。尽管大量的研究集中在心肌的再灌注损伤，可是在其他器官中，包括肝脏，脑，骨骼肌，小肠等组织器官同样重要。在再灌注损伤过程中，腺苷通过调节中性粒细胞功能，改善再灌注损伤时的微循环无复流现象，减少氧自由基的产生，防止钙超载和通过补充高能化合物的储备迅速恢复组织ATP水平等作用来减轻损伤。本实验采用大鼠胰腺脾部缺血再灌注模型，利用高效液相色谱，电镜等技术测定大鼠胰腺缺血再灌注时的能量变化和形态，功能变化。以及应用腺苷，腺苷非选择性阻滞剂8-PT，腺苷特异性A1受体阻止剂DPCPX对再灌注损伤的影响。研究外源性腺苷在大鼠胰腺缺血再灌注损伤的作用和机制。 材料和方法 Waistar大鼠35只随机分为5组（每组7只）。①C组：空白对照组；②I／R组：缺血再灌注组；③ADO组：I／R+ADO；④8-PT组：I／R+ADO+8-PT；⑤DPCPX组：I／R+ADO+DPCPX。Wistar大鼠数术晚禁食，自由饮水。10％水合氯醛（3ml／kg）腹腔注射麻醉，碘伏消毒后，腹部正中切口，显露腹腔干，脾动静脉。C组仅行麻醉和开腹显露少R组脾动脉夹闭 30分钟，移去动脉央再灌注90分钟；ADO组于脾动脉夹闭前 10分钟腹腔注射 ADO门 厂8－PT组于腹腔注射 ADO前 5分钟阴茎背静脉注射 8－Pf（10mg／kg）；DPC见组于 ADO注射前 5分钟腹腔注射 DPC瞅（ mg／kg人缺血 30分钟，再灌注 90分钟后，由下腔静脉采血（约3Inl）离心p000r／min 15分钟）后血清一20℃保存，生化自动分析仪测定淀粉酶。脾部胰腺切取，取少量胰腺组织门一二rum门分别10％甲醛和 2．5％戊二醛固定，HE染色及透射电镜观察。其余胰腺液氮（一196℃）保存（后转至一80℃深低温冰箱人HPLC 高效液相相色谱）测定能量物质。色谱条件：色谱柱：Nova－pah CISp．grnm x 150rum Waters公司人流动相 0．2％三乙胺缓冲液（H。PO。滴定 PH 6．9）；流速 0．gITil／min；紫外线检测波长 254urn；进样量50ul。样品制备：电子天平称取胰腺组织200mg，加入0．4％冰高氯酸 IITil，在组织匀浆机上制成匀浆(冰浴中厂斗℃以下8000r／min离心 5分钟，上清 Indl一碳酸钾滴定 PH 7．0，4℃以下8000r／drin离心5分钟。微量加样器上清50ul进样。 结 果 1．各组 ATP （20994 L 12674／135135 L 27059”／177895 t49383”／247655 t 89755／247363 t 36233＊p＜0．05）；TAN（984556土卫0轧28／5刀196土3叩“”／698刀56土3009”／663785 土10℃8＊／7347 17。3152＊p＜0．05），EC（0．39。0．02／0．38。0．02”／0．39。0．04”＊p＜0．05），胰淀粉酶（395．71。50．12／2325．002。SO．10”／2034．28 t 271．83”／2363．叱2 土19．24／1896．854土71．86”＊p＜0．05）变化。ADO组明显改善，ADO组、8－8组。DPCPX组能量代谢无明显差异。 ·2· 2．HE染色及电镜观察ADO组改善；8－p组与I／R组近似； DPCPX组与 ADO组无明显差别。 讨 论 研究显示，缺血组织在再灌注时会发生没有死亡的细胞发生 不可逆的损伤。现在认为再灌注损伤是一个多因素互相影响的网 络化的病理生理过程。尽管明确的机制仍没由阐明，但许多学说 被提出，包括：＊中性粒细胞介导的血管内皮细胞和组织细胞的损 伤；2．氧自由基的损伤；3．微循环的无复流现象；4．钙超载；5．能量 代谢变化等。 大量的研究表明，缺血过程中大量的腺着聚集与再灌注损伤 有关，提示腺着在组织的再灌注损伤中起着重要的作用。尽管大 量的研究集中在心肌的再灌注损伤，可是在其他器官中，包括肝 脏，脑，肌肉，小肠，胰腺等同样重要。在再灌注损伤过程中，腺耷 通过调节中性粒细胞功能，改善再灌注损伤时的微循环无复流现 象，减少氧自由基的产生，防止钙超载和通过补充高能化合物的储 备迅速恢复组织ATP水平等作用来减轻损伤。 研究腺昔及其受体的作用主要由缺血预处理现象的发现而引 起。不同研究表明，在兔，狗，猪心肌，腺普及其受体可以模拟IPC 对I／R的保护作用。但是大量实验表明，由于存在种属特异性和 器官特异性，腺普及其受体A1，A／分为Au，Am厂八；在不同的种 属，不同的器官十心肌，脑，肝脏等八起着不?