目的通过探索大鼠创伤性颅脑损伤（Traumatic brain injury,TBI）后脑组织中Piwi相互作用RNA（Piwi-interacting RNA,Pi RNA）及Pi RNA/Piwi通路中相关蛋白Piwil2、Piwil4的表达变化,从而探寻TBI可能存在的潜在标志物,并初步探讨其可能的作用机制,以期为Pi RNA在法医学颅脑损伤鉴定的应用提供理论与实验依据。方法1.建立大鼠TBI模型,将12只SD大鼠随机分为空白对照组（KBZ）和实验打击组（DJZ）,采用HE染色法观察大鼠脑组织形态学改变。2.应用基因测序技术检测TBI后Pi RNA表达情况,并筛选出表达差异显著的Pi RNA簇。3.应用实时荧光定量PCR（Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,q RTPCR）技术对Pi RNA测序结果进行验证。4.应用蛋白免疫印迹法（Western-blot,WB）检测TBI大鼠脑组织Pi RNA/piwi通路中Piwil2、Piwil4蛋白的表达情况。结果1.TBI大鼠模型建立成功。行为学观察实验打击组大鼠出现呼吸急促或呼吸极其微弱现象,四肢抽搐,反射现象如角膜、疼痛等反射消失:同时表现为颈项强直、上肢呈屈曲状态,下肢强直,30分钟内恢复意识,可自行站立行走,行走时向患侧转圈。行为学观察初步鉴定TBI建立成功。通过对大鼠脑组织HE染色,镜下见空白对照组大鼠脑组织神经细胞排列整齐,未见明显异常,细胞和胞核无极性化改变;实验打击组大鼠脑组织可见打击部位及周围血管充血明显,蛛网膜下腔出血,出现灶状脑挫伤现象,脑实质可见少量出血,并出现不同程度神经细胞坏死等表现。表明TBI大鼠模型建立成功。2.大鼠脑组织Pi RNA相关测序分析,确定Pi RNA cluster异常表达簇。通过高通量测序发现差异表达Pi RNA靶基因涉及多种生物学途径,主要有内质网中蛋白质的加工、GABA能突触、缺氧诱导因子-1（HIF-1）信号通路、Fcγ受体介导的吞噬作用、细胞减数分裂、加压素调节水的重吸收及各种内分泌因素调节钙的重吸收等众多信号途径。同时通过差异Pi RNA cluster火山图发现Pi RNA cluster55表达显著下调。3.应用q RT-PCR检测Pi RNA cluster55显示其表达下调。基因测序发现Pi RNA cluster55在脑组织中有显著性下调表现。应用q RT-PCR对Pi RNA cluster55检测验证。与空白对照组相比,TBI大鼠脑组织Pi RNA cluster55的表达下调,数据有统计学差异,P＜0.05;表明Pi RNA cluster55在TBI大鼠脑组织中确有下调表现。4.应用WB检测Pi RNA相关蛋白Piwil2、Piwil4显示两者表达升高。进一步检测Pi RNA相关蛋白Piwil2和Piwil4,结果显示,与空白对照组相比创伤性颅脑损伤大鼠脑组织中Piwil2、Piwil4蛋白的表达均升高,数据有统计学差异,P＜0.05。表明Piwil2和Piwil4蛋白与TBI可能存在相关性。结论1.本研究发现Pi RNA cluster55在TBI后显著下调,可能参与TBI后的调控作用。有望为Pi RNA在颅脑损伤中的机制及判定提供实验依据。2.通过高通量测序发现差异表达Pi RNA靶基因涉及多种生物学途径,推测Pi RNA从多方位参与颅脑损伤后的病理生理过程。3.TBI后Piwil2和Piwi I4蛋白表达上调,提示其可能参与TBI后的调控过程。