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目的:通过研究miRNA-21-5p在高氧性急性肺损伤(HALI)中对Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)早期凋亡的影响,证明miRNA-21-5p可经PTEN/Akt通路抑制HALI中AECⅡ早期凋亡。方法:健康雄性SD大鼠随机分为4组(n=6):CON组(对照组:空气中饲养),H组(损伤组:高氧建模),OE组(过表达组:miRNA-21-5p腺相关病毒过表达载体经气管插管滴入SD大鼠肺内并饲养3周,高氧建模),EV组(空载体组:miRNA-21-5p腺相关病毒空载体经气管插管滴入SD大鼠肺内并饲养3周,高氧建模)。检测各组0h、24h、48h及60h时间点肺损伤相关指标:颈动脉血的氧合指数(OI)和呼吸指数(RI),左肺上叶湿/干(W/D)重比的测量,左肺下叶光镜检测及病理评分;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组不同时间点AECⅡ中的miR-21-5p,PTEN mRNA;蛋白质印迹法(Western blot)检测各组不同时间点AECⅡ中的PTEN蛋白,Akt/pAkt;流式细胞术检测(FCM)检测各组不同时间点AECⅡ的早期凋亡率。结果:1.OI的变化:H组4个时间点OI随时间逐渐降低(P<0.05)。2.RI的变化:H组4个时间点RI随时间逐渐增高(P<0.05)。3.W/D重比的变化:H组4个时间点W/D重比随时间逐渐增高(P<0.05)。4.左肺下叶光镜检测:CON组肺泡肺间质偶见中性粒细胞。H组肺组织损伤随时间逐渐加重;0h时间点,肺泡肺间质偶见中性粒细胞;24h时间点,肺泡肺间质可见中性粒细胞;48h时间点,肺泡肺间质可见中性粒细胞,肺泡可见蛋白质碎片填充及偶见透明膜形成;60h时间点,肺泡肺间质可见中性粒细胞,肺泡可见蛋白质碎片填充及透明膜形成;肺泡间隔偶见增厚。5.左肺下叶病理评分的变化:H组4个时间点病理评分随时间逐渐增高(P<0.05)。6.RT-qPCR检测miRNA-21-5p和PTEN mRNA的变化:(1)miRNA-21-5p:H组、OE组及EV组4个时间点miRNA-21-5p随时间逐渐增高(P<0.05);24h、48h及60h时间点,与CON组相比,H组及EV组miRNA-21-5p显著增高(P<0.05);0h、24h、48h及60h时间点,与H组相比,OE组mi RNA-21-5p显著增高(P<0.05)。(2)PTENmRNA:H组、OE组及EV组4个时间点PTEN mRNA随时间逐渐降低(P<0.05)。24h、48h及60h时间点,与CON组相比,H组、OE组及EV组PTENmRNA显著降低(P<0.05);0h、24h、48h及60h时间点,与H组相比,OE组PTEN mRNA显著降低(P<0.05)。7.Western blot检测PTEN蛋白和Akt/pAkt的变化:(1)PTEN蛋白:H组、OE组及EV组PTEN蛋白随时间逐渐降低(P<0.05)。24h、48h及60h时间点,与CON组相比,H组及EV组PTEN蛋白明显降低(P<0.05);0h、24h、48h及60h时间点,与H组相比,OE组PTEN蛋白显著降低(P<0.05)。(2)p-Akt/Akt:H组、OE组及EV组p-Akt/Akt随时间逐渐增高(P<0.05)。24h、48h及60h时间点,与CON组相比,H组及EV组p-Akt/Akt明显增高(P<0.05);0h、24h、48h及60h时间点,与H组相比,OE组p-Akt/Akt显著增高。8.FCM检测AECⅡ的早期凋亡率:H组及EV组4个时间点早期凋亡随时间逐渐增高(P<0.05);48h及60h时间点早期凋亡随时间逐渐增高(P<0.05);24h、48h及60h时间点,与CON组相比,H组及EV组早期凋亡显著增高(P<0.05);24h、48h及60h时间点,与H组相比,OE组早期凋亡显著降低(P<0.05)。结论:miRNA-21-5p可经PTEN/Akt通路抑制HALI中AECⅡ早期凋亡。