苦皮藤内生真菌A10杀菌活性成分研究

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本论文以一株编号为A10的苦皮藤内生真菌为出发菌株,研究了其代谢产物的农用生物活性,对目标活性物质进行分离和结构解析,并对菌株进行了初步的鉴定,观察了添加物质对代谢产物的影响。主要结果如下:1对A10代谢产物进行了杀菌活性研究。生物测定结果表明,A10菌株发酵产物菌丝体的甲醇和乙酸乙酯提取物对多种病原真菌具有较强的杀菌活性。其中乙酸乙酯提取物的杀菌活性较甲醇好,在1000μg·mL-1浓度下对烟草赤星病菌、小麦根腐病菌、玉米大斑病菌、番茄灰霉病菌、苹果轮纹病菌的菌丝生长抑制率均大于90%。盆栽试验结果表明,A10菌株发酵产物菌丝体的乙酸乙酯提取物在2000μg·mL-1浓度下对小麦白粉病的治疗和保护作用均在70%以上。2根据真菌的分类及鉴定方法,用光学显微镜观察A10菌株气生菌丝、分生孢子、产孢细胞及菌落性状,对比相关分类系统,将A10菌株初步鉴定为卵形孢霉属(Oosporawallr)。3采用常压柱层析、HPLC制备等方法,在生物活性追踪指引下,从A10菌株代谢产物菌丝体提取物中分离出5个化合物QY01、QY02、QY03、QY04、QY05。经波谱技术鉴定QY01、QY04、QY05分别为细胞松弛素D ,麦角甾醇,卫矛醇,QY02和QY03由于含量低于5mg未作进一步的鉴定,但结合光谱分析,可断定它们和QY01为同系物。在100μg·mL-1浓度时,QY01、QY02、QY03对烟草赤星病菌的活性比较高,达到50%以上。因此,我们可以初步推断,A10菌株代谢产物的抑菌活性主要是由这3个化合物贡献的,其中以QY01的活性最高,它对烟草赤星病菌的EC50为35.01μg·mL-1。4比较溴化乙锭和2-氨基吡啶两种添加物质在不同的浓度下对A10菌株代谢产物的影响,结果表明,在添加物质为溴化乙锭,添加浓度为0.4×10-6mg·mL-1时,A10菌株代谢的生物量和代谢产物细胞松弛素D均比未添加的原始培养液下的含量有明显的增加,且随着添加浓度的增大,含量均明显上升。而添加2-氨基苯胺的处理,在添加浓度为0.01 mg·mL-1时,A10菌株代谢的生物量和代谢产物细胞松弛素D均比原始的发酵培养基的低,且随着所添加浓度的增加,生物量和代谢产物细胞松弛素D的含量显著的减少。
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