目的 建立多肿瘤抑制基因（MTS1或p16基因）纯合性缺失分析方法，探讨胸水p16基因纯合性缺失检测的临床意义。方法 本研究以人Hela细胞mRNA为模板，经RT-PCR获得p16第二外显子cDNA，插入质粒pGEM-T中，然后转化E.coliXL1-blue，经限制性内切酶酶切图谱分析，并以美国冷泉港实验室提供的p16基因第二外显子cDNA为探针证实我们所构建的重组质粒含p16基因第二外显子。此重组质粒经扩大培养、质粒纯化、EcoR1酶切、酶切DNA片段纯化获得p16基因第二外显子cDNA作为DNA探针；用地高辛标记法标记p16cDNA探针。再根据已发表的p16基因序列，设计p16基因第一、第二外显子和CDK4引物，以CDK4为内参照，经PCR获得特异扩增产物，无p16基因的PCR产物而出现CDK4扩增产物者为p16基因第一、第二外显子纯合性缺失。结果21例结核性胸水无一例存在p16基因纯合性缺失，31例癌性胸水中均未出现p16基因第一外显子纯合性缺失，但发现有12例存在p16基因第二外显子纯合性缺失，阳性率为38.7％（12/31）。同时也作了胸水细胞学检测，16例胸水细胞学阳性，其阳性率为51.62％（16/31）。在15例胸水细胞学阴性标本中，有6例存在p16基因第二外显子纯合性缺失，两者联合检测，阳性率提高至70.97％（22/31）。结论 本研究表明胸水p16基因第二外显子纯合性缺失的检测对癌性胸水诊断特异性高（100％），无假阳性，与胸水细胞学联合检测可增加诊断的阳性率，并可补充和提高胸水细胞学的诊断价值。