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一、hPMSCs移植修复自身免疫性卵巢早衰小鼠卵巢功能作用及其与Treg细胞及TGF-β、IFN-γ的关系目的:检测人胎盘间充质干细胞(human placenta-derived mesenchymal stem cells,hPMSCs)移植对自身免疫性卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)小鼠卵巢功能的修复作用,并探讨该修复功能与调节性T细胞(regulatory T cells,Treg cells)及转录生长因子 β(transforming growth factor β,TGF-β)、干扰素 γ(interferon γ,IFN-γ)的关系。方法:利用小鼠透明带多肽3(zona pellucida glycoprotein 3,ZP3)建立自身免疫性卵巢早衰小鼠模型,通过酶联检测(enzyme linked immunosorbent assay,ELIS A)定性检测小鼠血清抗透明带抗体(Anti-zona pellucida antibody,AZPAb)筛选小鼠后,部分给予尾静脉注射hPMSCs悬液处理。通过HE染色(histopathology examination,H&E)检测小鼠动情周期变化及卵巢形态变化并进行卵泡计数;采用ELISA检测血清雌二醇激素(estradiol,E2)和卵泡刺激素(follicle stimulation hormone,FSH)的表达变化;利用免疫组化(immunohistochemistry,IHC)检测卵巢颗粒细胞(granular cells,GCs)凋亡情况。通过流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测小鼠脾细胞Treg细胞百分比;通过ELISA检测小鼠血清TGF-β及IFN-γ表达变化。结果:经hPMSCs移植治疗后,POF小鼠卵巢功能显著改善,主要表现为:紊乱的动情周期趋于正常;卵巢纤维化程度降低,功能性卵泡数目增多,闭锁卵泡数目减少;血清E2和FSH表达水平基本恢复正常;卵巢GCs凋亡显著减少。从免疫学角度研究发现,小鼠体内Treg细胞表达增加,同时TGF-β表达增加并伴IFN-γ表达降低。结论:hPMSCs能够修复自身免疫性卵巢早衰小鼠卵巢功能,且该修复功能可能通过上调Treg细胞及TGF-β表达,并下调IFN-γ表达实现。二、hPMSCs移植可能通过激活PI3K/Akt信号通路调节体内Th17/Tc17和Th17/Treg平衡修复自身免疫性卵巢早衰小鼠卵巢功能目的:探索hPMSCs移植修复自身免疫性卵巢早衰小鼠卵巢功能是否通过激活PI3K/Akt信号通路发挥作用,以及该修复功能与Th17,Tc17和Treg的关系。方法:体内实验构建自身免疫性POF小鼠模型后,部分经尾静脉注射hPMSCs悬液,两周后细胞治疗组小鼠部分给予PI3K/Akt信号通路阻断剂LY294002 处理。ELISA检测小鼠血清 E2,FSH,黄体生成素(luteinizing hormone,LH),抗缪勒管激素(Anti-Mullerianhormone,AMH)及 AZPAb 的表达;HE染色检测卵巢形态变化并计数卵泡;免疫组化检测卵巢caspase-3表达以确定卵巢颗粒细胞凋亡情况;IHC及蛋白印迹(western blot,WB)检测p-Akt蛋白的表达;FCM检测Th17,Tc17,Treg细胞表达;ELISA检测血清IL-17的表达。体外实验分离培养卵巢GCs,部分与hPMSCs上清共培养后给予不同浓度LY294002处理,MTT法检测不同情况下GCs增殖情况;FCM检测GCs凋亡情况。结果:与仅接受hPMSCs移植处理小鼠相比,LY294002处理小鼠血清E2,AMH表达下降,而FSH,LH,AZPAb表达增加;卵巢结构萎缩,纤维化程度加重,功能性卵泡几近耗竭,卵巢颗粒细胞凋亡显著增加;卵巢中Akt磷酸化水平显著降低;小鼠脾细胞中Th17/Tc17和Th17/Treg比值明显增高,血清IL-17表达也显著增加。同时,LY294002能够显著抑制GCs增殖并增加其凋亡率。结论:hPMSCs移植功能可能通过激活PI3K/Akt信号通路下调体内Th17/Tc17和Th17/Treg细胞平衡修复卵巢早衰小鼠卵巢。