近年来，抗体疗法在肿瘤临床受到越来越多的关注，尤其以CD20为靶点治疗非霍杰金氏淋巴瘤的单克隆抗体（包括放射性标记的抗体）在临床已经取得了令人瞩目的成功。目前，美国FDA已正式批准上市的抗CD20抗体有Rituximab（Rituxan（?）），Bexxar^TM和Zevalin^TM，这说明抗CD20抗体在临床应用具有较好的安全性。尽管抗CD20抗体在临床治疗非何杰金氏淋巴瘤上获得了成功，但是其抑制肿瘤的作用机理仍有一定的争议，还需进一步深入研究。我们开发了具有我国知识产权的新的抗CD20抗体HI47及其嵌合片段。本文主要目的是研究一突变的抗CD20抗体克隆，研究抗CD20抗体的体外生物学活性以及为了增加抗体杀伤肿瘤的效率，构建可以在真核细胞CHO中表达的完整嵌合抗CD20抗体分子。 本文利用噬菌体显示技术成功地从H147杂交瘤细胞中克隆单克隆抗CD20抗体HI47的轻重链可变区基因，构建成抗CD20单链抗体的表达载体pCANTAB 5E CD20ScFv，发现有克隆（-7）的轻链26位氨基酸为Asn，而其它克隆（-2）轻链26位氨基酸均为Ser。利用基因工程的方法，将两种克隆分别构建成嵌合抗CD20抗体Fab′片段（CD20-7和CD20-2），并在大肠杆菌16c9中表达。从抗CD20单链抗体表达载体pCANTAB 5E CD20ScFv上扩增抗CD20抗体轻、重链可变区基因VL和VH，将VL、VH基因通过分别含有人IgG1 CL和CH1的中间载体sspB11和sspB12，构建成抗CD20嵌合抗体片段Fab′表达载体pYZFcd20。CD20-7的产量和活性均高于CD20-2，CD20-7表达量为6.8 mg／L，CD20-2表达量的3倍。CD20-7和CD20-2亲和力常数Ka分别约为2.2×10⁹M^-1和1×10⁹M^-1。免疫荧光抑制实验表明，同等摩尔量的CD20-7和CD20-2能竞争性抑制鼠源性抗CD20抗体HI47和CD20表达阳性的Raji细胞的结合，分别使HI47的结合阳性率由98％下降至38％和71％。MTT法测定的体外Raji细胞生长抑制试验表明二者均以剂量依赖的方式抑制细胞生长，CD20-7和CD20-2的IC50值分别约为29.5和63.7μg／ml。以上说明轻链的S26N对抗体片段Fab′的较高水平的表达和生物活性的提高有一定的贡献。 由于Fab′易形成多聚体，在生物活性实验中用基因工程抗体片段Fab代替Fab′。研究表明，HI47及其嵌合抗体Fab和F（ab′）₂片段(轻链带有S26N