论文部分内容阅读
研究背景腰椎间盘突出症患者是腰腿痛患者的主要来源之一,该病所致的腰痛和神经根性痛是患者最主要的痛苦,极大地影响了患者的生活质量。腰椎间盘突出症所致的腰痛和神经根性痛发病的多源性也越来越受到人们的重视,除了机械压迫外,化学物质刺激,神经系统的炎性反应与免疫反应,以及疼痛感受器致敏等均参与了腰痛及神经根性痛的发生。髓核作为一种正常的间盘组织存在于机体内,一旦纤维环破裂,髓核突出暴露于机体的免疫系统,将会激发神经系统强烈的自身免疫反应和炎症改变,引起白细胞的活化和渗透、炎症细胞因子释放以及神经细胞变性,最终导致脊髓伤害感受性神经元的激活,引起神经病理性疼痛。消退素(resolvin)是一种由ω-3多不饱和脂肪酸衍生的新型促炎症消退介质。具有阻碍白细胞浸润、下调炎症介质、促进凋亡的中性粒细胞及细胞碎片的吞噬摄取等功效,在炎症早期促进炎症的及时消退。目前大量研究已经证实,消退素在多种炎性疾病如：哮喘、脓毒症、牙周病及视网膜病变等,显示出了良好的抗炎促消退作用。此外,新近研究还发现,消退素对于一些炎性和神经病理性疼痛的模型大鼠也发挥了显著的镇痛效应。然而消退素在腰椎间盘突出所致的大鼠根性神经痛模型中的作用,却鲜有报道。本研究在建立非压迫性腰椎间盘突出症模型大鼠的基础上,探讨消退素D1(Resolvin D1, RvD1)对根性神经痛的作用及内在机制。研究目的本研究通过建立非压迫性腰椎间盘突出症模型大鼠,采用鞘内给药的方式,探讨RvD1对大鼠疼痛反应及神经根炎症的作用及内在机制。研究方法1.将152只大鼠按随机数字法平均分成4组：假手术组(假手术+10 μl PBS).模型组(模型+10μlPBS)、RvD1 10ng组(模型+10μl RvD1 10ng)、RvD1 100ng组(模型+10μl RvD1 100 ng),每组38只。建立非压迫性腰椎间盘突出症大鼠模型,于术后连续3天鞘内注射RvD1或PBS 10 μl。2.术前1d及术后第1、2、3、4、7、10、21d观察并记录各组大鼠术侧50%缩足阈值(paw withdrawal threshold, PWT)。术后第7d,取各组大鼠术侧脊髓背角(L4-L6)及L5背根神经节(dorsal root ganglion, DRG),通过RT-PCR(real-time polymerase chain reaction)和ELISA (enzyme-linked immune sorbent assay)技术测定各组大鼠脊髓背角中炎性因子TNF-α (tumor necrosis factor-α)、IL-1β (interleukin-1β)、IL-10 (interleukin-10)和TGF-β1(Transforming growth factor-β1) mRNA及蛋白的含量；应用ELISA技术检测L5 DRG中炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-10和TGF-β1蛋白的含量。此外,利用Western blot技术检测各组大鼠术侧脊髓背角中NF-κB/p65(Nuclear factor-KB/p65)和ERK(Extracellular signal-regulated kinase, p-ERK、t-ERK)通路蛋白的表达量；应用免疫组化技术检测术侧脊髓背角及L5DRG中NF-κB/p65和p-ERK阳性细胞表达量。结果术前1d至术后21d的观察期内,术后各时间点模型组大鼠50%PWT较假手术组明显降低；鞘内注射消退素RvD1(10ng or 100ng)能明显升高大鼠术侧50%PWT。非压迫模型建模后第7d,模型组大鼠脊髓背角和DRG中TNF-α和IL-1β的表达较假手术组明显升高,IL-10和TGF-β1的表达较假手术组明显降低；鞘内给予RvD1 (10ng or 100ng)能明显降低大鼠脊髓背角及DRG中的TNF-α和IL-1 β水平,升高IL-10和TGF-β1的表达水平,且呈剂量依赖性。非压迫模型建模后第7d,模型组大鼠脊髓背角中NF-κB/p65、p-ERK蛋白水平较假手术组明显升高,脊髓背角及DRG中NF-KB/p65及p-ERK阳性细胞表达量明显升高；鞘内注射RvD1 (10ng or 1000ng)后,大鼠脊髓背角NF-κB/p65、p-ERK蛋白水平明显降低,脊髓背角及DRG中NF-κB/p65、p-ERK阳性细胞表达量明显减少,且呈剂量依赖性。结论鞘内给予消退素RvDl后,非压迫性腰椎间盘突出症模型大鼠的根性神经痛明显减轻,脊髓背角及DRG中促炎因子(TNF-α和IL-1β)明显减少、抗炎因子(TGF-β1和IL-10)的表达明显升高,其机制可能是通过抑制脊髓背角及DRG中NF-κB/p65和p-ERK通路的活性,从而促进神经根炎症的消退。鞘内注射消退素RvDl为神经根炎及坐骨神经痛的治疗提供了新的思路和依据。