马钱子为马钱科植物马钱Strychnos nux-vomica L.的干燥成熟种子,临床主要用于治疗痈疽肿痛、类风湿性关节痛、风湿顽痹、麻木瘫痪等。马钱子碱和士的宁是马钱子中主要的有效成分同时也有较强的毒副作用,且马钱子的治疗剂量与中毒剂量较接近,治疗窗较为狭窄,马钱子碱与士的宁通过不同途径进入体内并且分布广泛,具有强烈的中枢神经兴奋作用,容易发生神经和心脏中毒反应使马钱子的应用受到了很大限制,因此马钱子的减毒机制研究具有重要意义本课题组前期透皮吸收研究结果显示白芍总苷与马钱子总碱配伍可以减少毒性成分的透过量。本课题组前期关于正常剂量和中毒剂量马钱子碱/士的宁分别与芍药苷配伍后各成分在大鼠体内的代谢动力学和脑组织分布实验,研究结果表明表明马钱子碱/士的宁与芍药苷配伍经皮给药后在一定程度上可抑制脑组织和血液中士的宁吸收和促进芍药苷渗透。这些可部分验证或解释其提取物配伍的合理性。课题组前期基于MDCK-MDR1细胞模型的马钱子和白芍配伍减毒机制的研究中,MTT实验结果表明马钱子提取物与白芍提取物配伍比例为1:6时减毒效果较好,转运实验结果表明马钱子配伍白芍,马钱子碱和士的宁的AP-BL的表观渗透系数明显减小,外排率显著增大,表明马钱子配伍白芍后可以减少马钱子的毒性。但基于MDCK-MDR1细胞模型的马钱子碱/士的宁与芍药苷/芍药内酯苷/没食子酸配伍的研究尚未报道,本论文实验将在前期部分研究的基础上,以马钱子碱、士的宁、芍药苷、芍药内酯苷、没食子酸单一成分为研究对象,进一步阐明马钱子碱/士的宁与芍药苷/芍药内酯苷/没食子酸单用及配伍时的细胞毒性、转运机制及对P-gp表达的影响。本文采用MTT法测定马钱子碱/士的宁与芍药苷/芍药内酯苷/没食子酸单用及配伍时对MDCK-MDR1细胞的安全范围,并确定马钱子碱/士的宁与芍药苷/芍药内酯苷/没食子酸配伍的最佳比例;以P_app、C_CUM、ER为指标,研究马钱子碱/士的宁与芍药苷/芍药内酯苷/没食子酸单用及配伍在MDCK-MDR1细胞模型上转运机制;采用Western blot法研究马钱子碱/士的宁与芍药苷/芍药内酯苷/没食子酸单用及配伍对P-gp表达的影响,对马钱子碱/士的宁与芍药苷/芍药内酯苷/没食子酸单用及配伍减毒机理进行更深层次的分析。具体实验研究结果如下:1.马钱子碱的细胞安全浓度范围0⁰.10μg/mL,士的宁的细胞安全浓度范围0⁰.04μg/mL,芍药苷的细胞安全浓度范围0⁵0μg/mL,芍药内酯苷的细胞安全浓度范围0⁵0μg/mL,没食子酸的细胞安全浓度范围0²5μg/mL。当马钱子碱与芍药苷/芍药内酯苷/没食子酸两两配伍的比例分别为1:2、1:1、1:2时马钱子碱的安全无毒性范围增至为0¹.0μg/mL;当士的宁与芍药苷/芍药内酯苷/没食子酸两两配伍的比例分别为1:4、1:3、1:4时士的宁的安全无毒性范围增至为0⁰.40μg/mL,马钱子碱/士的宁均对MDCK-MDR1细胞存在细胞毒性作用,呈剂量依赖关系,马钱子碱的细胞毒性明显小于士的宁,马钱子碱/士的宁与白芍三种活性组分芍药苷/芍药内酯苷/没食子酸配伍可以大大减小马钱子碱和士的宁的毒性。2.在对马钱子碱/士的宁与芍药苷/芍药内酯苷/没食子酸单用及配伍在MDCK-MDR1细胞模型上转运的影响研究发现芍药苷/芍药内酯苷可以减少马钱子碱/士的宁的吸收,增加了外排率,使马钱子碱和士的宁在细胞内蓄积减少,进而起到减毒的作用。而配伍后芍药苷/芍药内酯苷主要在P_{app（B→A）}方向的表观渗透系数都发生了相应的变化。3.采用Western blot法研究马钱子碱/士的宁与芍药苷/芍药内酯苷/没食子酸单用及配伍对P-gp表达的影响的研究,马钱子碱/士的宁配伍芍药苷/芍药内酯苷/没食子酸会上调P-gp的表达,说明配伍后增强了P-gp的外排作用,促进了马钱子碱/士的宁的外排,使马钱子碱/士的宁在MDCK-MDR1细胞内蓄积减少,从而起到减毒的作用。本课题前期关于马钱子及其与白芍配伍对P-gp表达的影响结果表明当两者配伍后,P-gp的表达水平明显升高。所以本实验与前期实验结果相比P-gp的表达较为相似。本文研究结果解释了马钱子碱/士的宁与芍药苷/芍药内酯苷/没食子酸配伍的减毒机制,从单一成分配伍的角度进一步阐明马钱子配伍白芍的减毒机制,为中药马钱子的减毒机制研究提供了一个新的思路,也拓展了马钱子、白芍的应用空间,为临床应用提供数据支撑。