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鸭疫里默氏杆菌感染,又称为鸭传染性浆膜炎,是家鸭、鹅、火鸡等多种禽类的一种接触性传染病,也是危害全世界养鸭业的一种主要疾病。该病以病鸭死亡率高、消瘦、胴体淘汰、品质下降和疾病治疗等造成较大的经济损失。RA血清型至少有21个,各血清型之间交叉保护性很低或无。现在国内外已经有商业化的油乳剂疫苗用于对该病的预防,但接种油乳剂疫苗易使雏鸭造成应激反应且肉鸭上市时油乳剂还可能在鸭体内有残留;而弱毒活疫苗则不存在上述风险。基因缺失活疫苗因安全性好,可保留菌株的免疫原性、毒力不易返强等而备受关注。从鸭疫里默氏杆菌2000个左右的基因中,筛选出缺失的候选靶基因是构建基因缺失疫苗株的关键节点。在本实验室的前期研究中,我们鉴定到GL01019基因（本研究中简称为1019基因）的转座子插入缺失株对雏鸭的致病性显著降低。1019基因编码的蛋白可能参与细菌生物素的合成。为了分析1019基因能否作为构建鸭疫里默氏杆菌基因缺失疫苗株的缺失靶基因,本研究将构建鸭疫里默氏杆菌血清1型WJ4株的1019基因缺失株,通过生物学特性分析1019基因缺失对鸭疫里默氏杆菌致病性的影响,以及缺失株感染鸭血液、肝脏和脑组织中的细菌载量,以评估其作为构建基因缺失疫苗株的缺失靶基因的可行性。本研究先将1019基因的上下游同源臂连入自杀质粒313,构建重组自杀质粒313-1019-LR,再以大肠杆菌S17-1（313-1019-LR）株为供体菌、野生株WJ4为受体菌,采用接合转导的方法,将重组自杀质粒313-1019-LR导入鸭疫里默氏杆菌WJ4中;然后抗性筛选、蔗糖筛选和PCR鉴定等,鉴定到1019基因缺失株WJ4Δ1019。将1019基因ORF连入大肠杆菌-鸭疫里默氏杆菌穿梭表达质粒p RES2,构建得到重组穿梭质粒p RES2-1019。然后将S17-1（p RES2-1019）为供体菌、缺失株WJ4Δ1019为受体菌,通过接合转导将重组质粒p RES2-1019导入WJ4Δ1019,构建得到回复株c WJ4Δ1019。对野生株WJ4、缺失株WJ4Δ1019和回复株c WJ4Δ1019进行生物学特性分析。生长曲线测定结果表明1019基因缺失对鸭疫里默氏杆菌的生长无明显的影响;Vero细胞的粘附和入侵结果表明缺失株WJ4Δ1019对Vero细胞的粘附和入侵能力比野生株WJ4显著降低;雏鸭感染实验的结果显示,缺失株WJ4Δ1019对雏鸭的半数致死量大于1010CFU,且缺失株感染鸭血液、肝脏和脑组织中细菌载量很少或为零,表明1019基因与鸭疫里默氏杆菌的毒力相关;另一方面,感染鸭体内的细菌载量很少或为零,提示还需要进一步的动物实验验证和测定最小免疫剂量来判定1019基因是否可以用作构建鸭疫里默氏杆菌基因缺失疫苗株的候选缺失靶基因。本研究对于鸭疫里默氏杆菌弱毒疫苗的研制,以及鸭疫里默氏杆菌的分子致病机制的研究等具有重要意义。