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目的:肺癌是全世界死亡率最高的癌症之一。肺癌主要包括非小细胞肺癌(NSCLC)与小细胞肺癌(SCLC),非小细胞肺癌约占到80–85%。其中肺腺癌(LUAD)又是非小细胞肺癌中最常见的亚型之一,约占40%。肺腺癌的治疗方案,包括手术治疗,化疗,免疫疗法和靶向治疗,由于患者确诊时多有转移症状,所以晚期肺腺癌患者的5年生存率较低。因此,目前迫切需要更早期的诊断和更加有效的治疗策略来改善肺腺癌患者的预后。此次研究的目的是了解肺腺癌组织中CLSPN的表达情况及其对肺癌细胞增殖,迁移和侵袭的影响。进一步研究该基因的机制,并应用于临床实践,可为晚期肺腺癌患者的治疗带来新的方向和希望。方法:(1)从TCGA数据存储库(https://cancergenome.nih.gov/)下载了LUAD患者的RNA测序和临床数据。以进行基因表达分析和生存分析。临床数据包含病人的特征,TNM分期,组织学分型和生存信息等。信息不完整的样本均不包括在内。(2)于37℃、5%CO2胎牛血清培养基中进行肺腺癌细胞A549和PC-9细胞的培养,保持细胞良好的生长状态。然后加入最适病毒量进行感染,就可以继续用于体内外研究。我们一般选择两种细胞株中感染率较高的进入下游实验。(3)在前两步的基础上,采用CCK8法、流式细胞术、划痕实验、transwell侵袭实验探讨肺腺癌被CLSPN shRNA感染后,claspin表达水平变化对体外肺腺癌细胞生物学行为的影响。结果:(1)通过分析数据库中患者的临床资料,在人体内,与癌旁肺组织的细胞相比,肺腺癌细胞中CLSPN的表达明显更高,并且TNM分期晚期的患者CLSPN的表达量要比早期患者增高更加显著,尤其是在出现肺外转移的患者癌细胞内CLSPN升高的尤为明显。我们发现CLSPN高表达组的患者的年龄更小,但是死亡率更高,COX回归发现CLSPN的表达量确实与患者的生存时间有关,并且从生存曲线可明显地看出,CLSPN高表达的患者生存时间更短,所以CLSPN表达量的高低是患者预后的独立危险因素,初步提示了该基因的促癌作用。(2)我们选用人腺癌细胞A549和PC-9细胞进行了实时定量PCR。其结果显示,基因CLSPN在两种细胞珠中的表达丰度均很高。用CLSPN shRNA处理的A549和PC-9细胞系中的CLSPN表达被显著抑制(P<0.05),从而证实了敲减现象。我们选择敲减率更高的PC-9细胞株进行进一步研究。(3)用CLSPN shRNA处理的肺腺癌细胞株增殖明显地减慢,细胞凋亡却明显地提高,除此之外,转染病毒后地细胞迁移和侵袭能力被显著地抑制。我们的体外实验证明了CLSPN的表达在细胞层面可以被有效地抑制,并且进一步证实该基因了在肺腺癌发生发展中的促进作用。结论:与癌旁组织相比,CLSPN在肺癌组织中的表达明显升高(p<0.05)。肺癌组织中CLSPN的高表达与病理TNM分期晚期以及远处转移显著相关,但与性别,人种,肿瘤发生部位及发生叶段不相关。CLSPN高表达与肺腺癌患者预后不良有关,并且是肺腺癌患者的独立预后因素。因此,CLSPN会促进肺癌细胞的增殖,迁移和侵袭。所以进一步研究该基因的机制并应用于临床实践可为晚期肺腺癌患者的治疗带来新的方向和希望。