小泛素相关修饰物SUMO(small ubiquitin related-modifier)与蛋白的共价连接是一种新的广泛存在的翻译后修饰形式。SUMO是广泛存在于真核细胞中高度保守的蛋白家族，在脊椎动物中有4个SUMO基因，称为SUMO1、SIJMO2、SUMO3和SUMO4。SUMO与泛素在二级结构上极其相似，且催化过程的酶体系也具有很高的同源性。然而，与泛素化介导的蛋白酶降解途径不同，SUMO化修饰发挥着更为广泛的功能，如核质运输、细胞周期调控、信号转导和转录活性调控等。近来的研究表明，SUMO化修饰还参与调控线粒体分裂、DNA损伤修复及调节基因组稳定性和调控离子通道。此外，SUMO化修饰功能的紊乱会导致某些疾病的发生。 在SUMO家族中，SUMO1属于SUMO第一类家族，相关的研究报道比较多；而SUMO2属于SUMO第二类家族，相关的研究还十分有限。本研究根据己发表的人SUMO2的基因序列设计了特异性引物，以重组质粒pEYFP-SUMO2为模板，采用PCR法对SUMO2基因进行亚克隆，构建重组质粒pET41a-SUMO2-SUMO2。将构建成功的重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)plysS中，筛选含重组质粒的基因工程菌。重组工程菌经IPTG诱导得到高效表达，其细胞裂解物用SDS-PAGE进行检测。用GST亲和层析法纯化表达蛋白，经SDS-PAGE方法及Western blotting检测，分析纯化的蛋白。用GST-SUMO2-SUMO2融合蛋白按照常规的方法免疫健康家兔，然后收集兔血清，用ELISA法测定抗血清的效价，用Western blotting检测其特异性。用制得的SUMO2多克隆抗体对Hela细胞中内源性的SUMO2表达进行了Western blotting检测以验证该抗体。此外，构建了SUMO2的真核表达载体pCMV-HA—SUMO2(HA—S2)、pCMV-Myc-SUMO2(Mye-S2)、pEGFP-SUMO2(G—S2)和pDsRed—SUMO2(R-S2)，并初步观察SUMO2的亚细胞定位及其与其他调控因子的共定位情况。 结果表明，本研究成功地亚克隆了人SUMO2基因。所构建的表达质粒pET41a-SUMO2-SUMO2在BL21(DE3)plysS中成功表达了分子量约为52KDa的融合蛋白，与预测的大小一致。用抗血清作为一抗进行Western blotting检测，结果表明此抗血清是针对人SUMO2的多抗。用抗血清作为包被抗体，用SUMO2作为检测抗原，进行ELISA试验，结果表明经四次免疫后，抗体效价约为1：40,000。同时，也检测到了Hela细胞中SUMO2的内源性表达并初步观察到了SUMO2在细胞核中的的亚细胞定位。 本研究的完成为进一步研究SUMO2在真核细胞中与其他蛋白的互作及定位打下了坚实的基础。