论文部分内容阅读
胃癌是全世界范围内常见的恶性肿瘤之一,全球每年新发病例占新发癌症病例总数的17%。胃癌发现时大多数处于晚期,化疗是治疗晚期胃癌的主要手段之一。死亡受体DR5单克隆抗体能够特异性的与肿瘤细胞表面的死亡受体DR5相结合,从而诱导肿瘤细胞凋亡,对正常细胞无明显毒害作用,因而成为应用前景广泛的抗肿瘤制剂。本研究将DR5的单克隆抗体HCTB006联合5-FU应用,观察其对胃癌细胞系7901、MKN28、BGC823增殖的影响以及作用机制,从而为胃癌的治疗提供新的思路。实验分组为HBCT006药组、5-Fu单药组及联合用药组,空白对照组。不同浓度药物作用于体外细胞培养的胃癌细胞系7901、MKN28、BGC823,12h后倒置荧光显微镜下观察细胞形态,24h或48h后采ATP-lite法检测细胞的存活率。采用流式细胞技术检测三种胃癌细胞系表面DR5的表达水平；Western Blot法检测不同药物组胃癌细胞系内XIAP, caspase3的变化。不同浓度以及分组药物作用于胃癌细胞系12h后,倒置相差显微镜下(40倍)可见对照细胞组贴壁生长,排列紧密；5-FU以及HTB006单药组可见贴壁细胞密度降低,细胞出现变圆、皱缩等形态：联合给药组可见贴壁细胞明显降低,细胞死亡增多。根据ATP-lite法检细胞存活率结果得知：胃癌细胞系7901、MKN28对HCTB006不敏感,HCTB006对胃癌细胞BGC823的增殖作用呈浓度依赖效应；5-FU对胃癌细胞系增殖抑制作用具有时间以及浓度依赖效应；联合用药组具有很好的协同抑制胃癌细胞系增殖的效果,具有浓度依赖效应,与给药次序无关。流式细胞技术检测胃癌细胞系7901、MKN28、BGC823表面死亡受体表达率依次为：93.8%、87.7%、94.2%。免疫印迹结果表明,联合用药组细胞内凋亡抑制蛋白XIAP降解,激活最终凋亡执行蛋白caspase3,引起细胞死亡。研究结果表明：不同胃癌细胞系对于DR5单克隆抗体HTB006敏感性不同。通过化疗药物5-FU联合HTB006能协同抑制胃癌细胞BGC823、7901、MKN28增殖,作用呈浓度依赖关系。研究联合用药的机制表明：胃癌细胞对于HTB006的敏感性与胃癌细胞表面死亡受体DR5的表达无明显相关,5-FU与HTB006协同作用机制可能与细胞内XIAP降解引起细胞凋亡相关。