中药组分复方CKJ对肝纤维化大鼠肝细胞凋亡的作用及配伍特点研究

来源 :上海中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dxcnet2009
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目的:  (1)通过量效关系的分析,探讨中药组分复方CKJ方对CCl4大鼠模型肝纤维化和肝细胞凋亡的影响和作用。  (2)通过与各单一组分比较,探讨中药组分复方CKJ对CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝细胞凋亡的配伍优势。  方法:  本论文分为两部分实验,均采用腹腔注射CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型,造模组大鼠以1ml/kg剂量腹腔注射50%CCl4橄榄油溶液,每周2次(周一上午和周四下午),共9周,并从第7周起造模的同时灌胃给药。  第一部分:将72只雄性Wistar大鼠,按体重随机分为正常组12只和造模组60只。造模组大鼠在造模6周后按体重再随机分为模型组、新CKJ低剂量组、新CKJ高剂量组、扶正化瘀方组和原CKJ方组,每组12只。各组大鼠予相应药物经口灌胃给药治疗3周。观察项目:(1)药效学变化:①各组大鼠一般情况;②血清ALT、AST变化;③肝组织Hyp含量;④肝组织HE染色、肝组织天狼星红染色观察及胶原纤维积分半定量分析;⑤肝组织α-SMA蛋白表达和Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)蛋白表达。(2)肝细胞凋亡相关变化:①肝组织Tunel染色;②肝组织Fas、Bcl-2、Bax、Bak、Caspase3、Caspase8、Caspase9、Caspase10蛋白表达情况(Western blot法)。  第二部分:将75只雄性Wistar大鼠,按体重随机6只为正常组,其余为造模组。造模组大鼠在造模6周后按体重再随机分为模型组、虫草多糖组(C,剂量60mg/kg)、苦杏仁苷组(K,80mg/kg)、绞股蓝总皂苷组(J,200mg/kg)、CKJ方组(含C、K、J分别为60、80、50mg/kg)、扶正化瘀方组。用药方法及时间同前。观察项目:(1)肝组织Tunel染色;(2)Western blot法检测肝组织α-SMA、Col-Ⅰ、Fas、TNF-α、Bcl-2、Bax、Bak、Cytochrome C、Caspase3、Caspase8、Caspase9、Caspase10蛋白表达情况。  结果:  第一部分:  1、药效学变化:(1)较之正常组,模型组血清ALT、AST活性及肝脏胶原(Hyp)含量均显著升高(P<0.01),肝组织出现显著的肝脏炎症和肝纤维化表现,肝纤维化程度主要分布在S3期;较之模型组,各用药组的血清ALT、AST活性及肝脏胶原(Hyp)含量均显著下降(P<0.01或P<0.05),肝组织的炎症和纤维化病理改变显著减轻(肝纤维化程度积分半定量分析P<0.01或P<0.05)。(2)较之正常组,模型组肝组织α-SMA阳性染色显著增强,且肝组织α-SMA和Col-Ⅰ蛋白表达水平明显升高(P<0.01);较之模型组,各用药组肝组织α-SMA阳性染色明显减轻,且肝组织α-SMA和Col-Ⅰ蛋白表达水平明显降低(P<0.01或P<0.05)。此外,新CKJ高剂量组对肝组织Col-Ⅰ蛋白表达的调控作用优于新CKJ低剂量组和原CKJ方组(P<0.05)。  2、肝细胞凋亡的相关变化:(1)较之正常组,模型组肝组织Tunel阳性染色细胞数目显著增加;且肝组织Fas、Bax、Bak、Caspase3、Caspase8、Caspase9、Caspase10肝组织蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.01);较之模型组,各用药组肝组织Tunel阳性染色细胞数目显著减少,且肝组织Fas、Bak、Caspase3、Caspase8、Caspase9、Caspase10的蛋白表达水平明显降低(P<0.01或P<0.05),Bcl-2的蛋白表达水平明显升高(P<0.01或P<0.05)。此外,新CKJ高剂量组和扶正化瘀方组可显著降低肝组织Bax蛋白水平表达(P<0.01或P<0.05);新CKJ高剂量组对肝组织Bax和Caspase3蛋白表达的调控作用优于新CKJ低剂量组和原CKJ方组(P<0.05),对肝组织Caspase8和Caspase9蛋白表达的调控作用优于原CKJ方组(P<0.05)。  第二部分:  (1)肝组织Tunel染色显示,较之正常组,模型组肝组织Tunel阳性染色细胞数目显著增加;较之模型组,各用药组肝组织Tunel阳性染色细胞数目显著减少。  (2)肝组织蛋白印迹结果显示,较之正常组,模型组大鼠肝组织α-SMA、Col-Ⅰ、Fas、TNF-a、Bax、Bak、Caspase3、Caspase8、Caspase9、Caspase10蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Bcl-2和Cytochrome C肝组织蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。较之模型组,CKJ方组可以显著降低肝组织α-SMA、Col-Ⅰ、Fas、TNF-α、Bax、Bak、Caspase3、Caspase8、Caspase9、Caspase10的蛋白水平表达(P<0.01或P<0.05),升高Bcl-2和Cytochrome C的蛋白表达水平(P<0.01或P<0.05),且与扶正化瘀方作用相当。CKJ方组对肝组织α-SMA蛋白表达水平的调控优于各单一组分组(P<0.01或P<0.05),对肝组织Col-Ⅰ和Bak蛋白表达水平的调控作用优于虫草多糖组和苦杏仁苷组(P<0.01或P<0.05),对肝组织Cytochrome C和Caspase10蛋白表达水平的调控作用优于苦杏仁苷组(P<0.01或P<0.05)。  结论:  1、中药组分复方CKJ抗肝纤维化的效应机制与抗肝细胞凋亡有密切关系。  2、由虫草多糖、苦杏仁苷、绞股蓝总皂苷组成的中药组分复方CKJ,其抗肝细胞凋亡的作用存在配伍增效的特点。
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