目的： 心律失常是严重威胁人类健康的心脏疾病,严重心律失常已经成为导致人类死亡的重要原因,中医药抗心律失常有其独特的疗效。银杏叶提取物(EGB)是一种含有多种活性成份并具有多种药理作用的中药,临床常用于冠心病和心脑缺血性疾病的防治,并有良好的疗效。目前未见有银杏叶提取物银杏酮酯(GBE50)抗心律失常作用及其机制的研究报道。本实验研究从整体、组织、细胞水平,通过制备不同的心律失常模型观察研究银杏酮酯抗心律失常的作用及其机理。 方法： 本研究采用乌头碱、哇巴因制大鼠整体心律失常模型,体表心电记录；离体豚鼠心房肌生理特性测定、哇巴因和高钙诱发豚鼠右心室乳头肌迟后除极和触发活动以及激光共聚焦显微技术测定细胞内游离钙等实验方法,研究银杏酮酯抗心律失常作用。 所有数据用均数±标准差(Mean±SD)表示,实验计数资料均用单因数方差分析以及t检验进行统计学分析,计量资料用精确概率法进行统计分析。 结果： 1.银杏酮酯对整体大鼠实验性心律失常的抑制作用 (1)哇巴因模型：观察哇巴因致大鼠心律失常(VP、VT、VF、CA)的阈剂量。与对照组相比GBE50和地尔硫卓能够提高哇巴因的致心律失常的阈剂量：其中8mg/Kg和16mg/Kg GBE50提高了哇巴因诱发VP的阈剂量、16mg/Kg GBE50提高了哇巴因诱发VT的阈剂量(P<0.05～0.01)。地尔硫卓组与GBE50组相比更能提高哇巴因的阈剂量,但统计学上无显著性差异(P>0.05)。 (2)乌头碱模型：观察乌头碱致大鼠心律失常(VP、VT、VF、CA)的阈剂量。GBE50和奎尼丁均能够提高乌头碱致心律失常的阈剂量：其中8mg/Kg GBE50能够提高乌头碱诱发VT的阈剂量,16mg/Kg GBE50能够提高乌头碱诱发的VF、CA的阈剂量,32mg/Kg GBE50能够提高乌头碱诱发VP、VT的阈剂量(P<0.05～0.01)。奎尼丁能够提高乌头碱诱发VP、VT的阈剂量(P<0.05)。16mg/Kg GBE50同奎尼丁相比更能提高乌头碱VT、VF的阈剂量,两组之间也存在显著性差异(P<0.05)。 2.银杏酮酯对离体豚鼠心房肌生理特性的影响 银杏酮酯(10、20、40、80、160mg/L)对右心房收缩频率抑制率分别为(4.23±3.23)％、(6.22±4.52)％、(8.18±5.09)％、(9.37±5.95)％、(9.73±6.78)％,其中除10 mg/L外,其它组别均与对照组比较具有显著性差异(P<0.05～0.01);银杏酮酯(10、20、40、80、160mg/L)对右心房收缩力抑制率分别为(16.10±27.61)％、(14.72±10.46)％、(18.96±7.80)％、(36.74±10.70)％、(42.32±12.51)％,上述数据均与对照组比较具有显著性差异(P<0.05)。银杏酮酯(10、20、40、80、160mg/L)对左心房收缩力抑制率分别为(12.26±8.86)％、(22.42±11.41)％、(32.65±14.40)％、(41.67±14.90)％、(47.09±15.05)％,上述数据均与对照组比较具有显著性差异(P<0.05～0.01)。银杏酮酯(10、20、40、80、160mg/L)使左心房静息后增强效应分别降至给药前的(87.30±14.02)％、(85.57±22.26)％、(75.37±16.94)％、(66.09±15.13)％、(65.71±12.08)％,除10mg/L外,上述数据均与对照组比较具有显著性差异(P<0.05～0.01)。40、80、160mg/L的GBE50可使心房肌功能不应期由给药前93.80 ms延长至给药后106.20 ms、111.10 ms、116.40ms(P<0.01)。 3.银杏酮酯对哇巴因所致的豚鼠乳头肌迟后除极和触发活动的影响 银杏酮酯可以明显抑制哇巴因、高钙诱发的延迟后除极(DAD)和触发活动(TA),并呈一定的浓度依赖性。GBE50大、中、小剂量组的DAD潜伏期从对照组的(12.37±2.26)min延长到(23.00±4.00)min(p<0.01)、(14.33±1.03)min、(12.50±2.43)min;DAD的幅值从对照组的(13.25±2.38)mV减少到(4.04±1.44)mV、(8.92±2.68)mV(p<0.01)、(10.41±3.06)mV(p<0.05);DAD的时程从对照组的(191.38±53.62)ms减少到(57.00±18.62)ms、(103.33±20.64)ms、(128.33±18.91)ms(p<0.01);DAD下方的面积从对照组的(978.45±293.27)mV.ms减少到(110.11±27.72)mV.ms、(461.32±147.32)mV.ms、(581.81±153.47)mV.ms(p<0.01);TA发生率从对照组的87.5％减少到16.67％(p<0.05)、33.33％、33.33％。 4.银杏酮酯对离体豚鼠心室肌细胞游离钙浓度的影响 50mg/L GBE50灌流后4min、8min、12min的细胞内[Ca2+]i比灌流前减少(20.76±5.62)％、(29.36±7.09)％、(46.53±8.44)％,上述数据均与灌流前数据比较具有显著性差异(p<0.01)。 结论： 1.应用Aco、Oua建立稳定的、重复性好的大鼠心律失常模型,银杏酮酯增加了Aco、Oua造成的大鼠VP、VT、VF、CA的诱发剂量且作用呈一定剂量依赖性。表明了银杏酮酯对Aco、Oua造成的心律失常有很好的抑制作用。 2.银杏酮酯降低右心房的自律性,降低心房的收缩力,延长左心房FRP,降低左心房的静息后增强效应,且作用呈一定剂量依赖性。表明了银杏酮酯抑制心律失常的作用与改善心肌特性有关。 3.应用哇巴因和高钙建立稳定的、重复性好的DAD和TA模型,银杏酮酯延长了DAD的潜伏期,缩短了DAD的时程,减少了DAD的幅值,抑制了TA的发生,表明了银杏酮酯抗心律失常的作用与抑制异常的电生理过程有关。 4.通过酶解法分离得到的大量的正常豚鼠心室肌活细胞,50mg/L银杏酮酯减少了细胞内游离钙浓度,推测银杏酮酯抑制心律失常的发生的机理之一可能与减少细胞内游离钙浓度有关。