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目的:研究青蒿琥酯(ART)对糖尿病大鼠模型创伤愈合的影响及对创口皮肤组织中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、转化生长因子β1(TGF-β1)、表皮生长因子(EGF)表达的调控作用,探索ART用于治疗糖尿病创伤愈合的可能性。方法:取健康雄性180-200g SD大鼠50只,适应性一周喂养后,随机抽取其中10只纳入健康对照组,另40只制备糖尿病模型。采用腹腔内注射链脲佐菌素(STZ)法诱导建立1型糖尿病大鼠模型,健康对照组10只大鼠注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液作为对照。定期监测体重和空腹血糖,成功建立糖尿病大鼠模型后。将上述大鼠分入五组:正常鼠生理盐水外用组、糖尿病鼠生理盐水外用组、糖尿病鼠0.5%ART外用组、糖尿病鼠1.0%ART外用组,糖尿病鼠重组人表皮生长因子溶液(rhEGF)外用组。在上述各组大鼠背部制备两个圆形的直径为1 cm的全层皮肤创口,次日起开始用药,正常鼠生理盐水外用组及糖尿病鼠生理盐水外用组的创口用生理盐水局部涂抹,糖尿病鼠0.5%ART外用组及糖尿病鼠1.0%ART外用组创口用生理盐水稀释ART至0.5%及1.0%浓度局部涂抹,糖尿病鼠rhEGF外用组创口用rhEGF溶液局部涂抹,每日1次,涂药14天。分别于涂药第1、3、5、7、10和14天对创口进行拍照,采用ImageJ图像分析系统测算创口未愈合面积,按创口愈合率=(原始创口面积-未愈合创口面积)/原始创口面积×100%计算创口愈合率。涂药第15天处死大鼠,收集各组大鼠的创口处皮肤组织标本,采用苏木精-伊红(HE)染色观察皮肤形态学改变,行Masson胶原染色法观察胶原结构,免疫组织化学法(IHC)检测皮肤组织中微血管密度、MMP-2、MMP-9、TGF-β1、EGF的表达,荧光定量RT-PCR法检测皮肤组织中 MMP-2、MMP-9、TGF-β1、EGF mRNA 的表达。结果:1、STZ注射1周及2周后,糖尿病各组大鼠空腹血糖明显增高,均大于16.7mmol/L,糖尿病各组大鼠的体重比正常组大鼠明显下降,糖尿病各组之间的空腹血糖及体重差异无统计学意义。构建大鼠背部创口1周及2周后,糖尿病各组大鼠的空腹血糖仍高于正常组大鼠,体重显著下降,糖尿病大鼠各组之间的空腹血糖及体重差异无统计学意义。2、创口涂药第3天,正常鼠生理盐水外用组、糖尿病鼠生理盐水外用组及糖尿病鼠各外用药组创口愈合率差异无统计学意义。涂药第5天,正常鼠生理盐水外用组、糖尿病鼠1.0%ART外用组、糖尿病鼠rhEGF外用组与糖尿病鼠生理盐水外用组相比,创口愈合率差异无统计学意义,而糖尿病鼠0.5%ART外用组创口愈合率较糖尿病鼠生理盐水外用组高。涂药第7天,正常鼠生理盐水外用组、糖尿病鼠1.0%ART外用组与糖尿病鼠生理盐水外用组相比较,创口愈合率差异无统计学意义,而糖尿病鼠0.5%ART外用组及糖尿病鼠rhEGF外用组创口愈合率较糖尿病鼠生理盐水外用组高。涂药第10天,正常鼠生理盐水外用组、糖尿病各用药组与糖尿病鼠生理盐水外用组相比,创口愈合率明显增高,其中,糖尿病鼠0.5%ART外用组相比糖尿病鼠1.0%ART外用组愈合率更高。涂药14天后,糖尿病鼠生理盐水外用组愈合情况一般,创口未愈合面积较大,创口愈合率较正常鼠生理盐水外用组低,糖尿病鼠各外用药组愈合较好,创口未愈合面积较小,创口愈合率较糖尿病鼠生理盐水外用组高。3、创口皮肤组织HE染色可见糖尿病鼠生理盐水外用组部分表皮移行尚未完全,相比正常鼠生理盐水外用组,成纤维细胞和新生血管较少,炎症细胞浸润较多,胶原纤维较疏松。糖尿病鼠0.5%ART外用组及糖尿病鼠1.0%ART外用组相比糖尿病鼠生理盐水外用组,表皮较完整,炎症细胞浸润较少。糖尿病鼠rhEG外用组相比糖尿病鼠生理盐水外用组表皮完整,可见较多新生血管及肉芽组织,成纤维细胞活跃。Masson胶原染色可见糖尿病鼠各外用药组比糖尿病鼠生理盐水外用组的胶原更为致密,排列紧密。4、免疫组织化学法检测结果:糖尿病鼠生理盐水外用组创口皮肤中MMP-2、MMP-9表达高于正常鼠生理盐水外用组,糖尿病鼠各外用药组和糖尿病鼠生理盐水外用组相比,MMP-2、MMP-9表达显著降低。糖尿病鼠生理盐水外用组创口皮肤中微血管密度、TGF-β1、EGF表达低于正常鼠生理盐水外用组,糖尿病鼠各ART用药组和糖尿病鼠生理盐水外用组相比,TGF-β1、EGF表达显著升高,糖尿病鼠rhEGF外用组和糖尿病鼠生理盐水外用组相比,微血管密度、TGF-β1、EGF表达显著升高。糖尿病鼠各外用药组间两两比较,MMP-2、MMP-9、TGF-β1、EGF表达差异均无统计学差异。5、荧光定量RT-PCR检测结果:糖尿病鼠生理盐水外用组创口皮肤中MMP-2、MMP-9 mRNA表达高于正常盐水组,糖尿病各外用药组较糖尿病鼠生理盐水外用组MMP-2、MMP-9 mRNA表达下降;糖尿病鼠生理盐水外用组TGF-β1、EGF mRNA表达低于正常盐水组,糖尿病鼠各外用药组较糖尿病鼠生理盐水外用组TGF-β1、EGF mRNA表达增高。糖尿病鼠各外用药组间两两比较,MMP-2、MMP-9、TGF-β1、EGF mRNA表达差异均无统计学差异。结论:1、糖尿病大鼠相比正常大鼠,其背部皮肤创伤愈合较差,皮肤组织中MMP-2、MMP-9的表达更高,TGF-β1、EGF的表达更低,微血管密度更低。2、ART外用及rhEGF外用可以促进糖尿病大鼠背部皮肤创伤愈合,可能通过下调创口皮肤组织中MMP-2、MMP-9的表达,并上调TGF-β1、EGF的表达发挥作用。