重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子,简称rhGM-CSF,由127个氨基酸组成,属于非糖基化水溶性蛋白,能够恢复骨髓粒细胞造血,加强造血细胞分化增殖,升高外周血白细胞,促进刺激单核巨噬细胞和粒细胞成熟[1-3]。现已广泛用于白血病及肿瘤患者大剂量放化疗后白细胞严重减少的治疗。近年来临床被广泛用于外用,主要方法为使用生理盐水溶解粉针剂,进行含漱、棉球擦拭等方式,直接作用于患病部位。但药物吸收利用效果不佳,开瓶使用后剩余的药液无法保存[4-7]。因此,为保护重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子液体长期储存的活性,保证药品稳定、安全、有效。本论文研制了rhGM-CSF喷雾剂,并对其药效学进行研究,结果如下：1.完成了rhGM-CSF喷雾剂处方筛选及工艺研究。通过对蛋白保护剂、透皮吸收剂、抑菌剂、磷酸盐缓冲体系的筛选,确定了对蛋白活性影响最小、开瓶使用后疗效最佳的喷雾剂处方。优化了制备工艺,保证生产的样品质量稳定可控；具体处方,主药成分：重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子蛋白20μ g/ml,蛋白保护剂：20%羟乙基淀粉-40,抑菌剂：0.2%乙二胺四乙酸二钠,透皮吸收剂：0.02%吐温-80,磷酸盐缓冲体系：1.25%磷酸氢二钠和0.4%磷酸二氢钠溶。2.确定了rhGM-CSF喷雾剂的质量标准。根据2010版药典第三部内容,建立了相关的质量标准,具体为：外观为淡黄色澄清溶液、每瓶总喷次不少于100次、每喷喷量0.08-0.12ml、装量不少于9.5ml、pH值6.0-7.0、鉴别应为阳性、无菌检查合格、生物学活性检测范围1.6×104IU/ml～3.0×104IU/ml。通过稳定性考察,结果表明在37±2℃条件下加速考察30天,活性平均下降10.12%,25±2℃条件下考察12个月,活性平均下降8.04%,2-8℃条件下长期考察12个月,活性平均下降4.03%,在照度4500LX±500LX室温条件下考察10天,活性平均下降1.64%。3.完成了rhGM-CSF喷雾剂毒理研究。结果表明rhGM-CSF喷雾剂外用安全可靠。使用800μ g/ml浓度的rhGM-CSF喷雾剂,对家兔进行急性毒性实验,给药后动物未见异常,证明其无毒副作用。使用20μ g/ml浓度的喷雾剂,对豚鼠进行皮肤过敏性实验,对家兔进行刺激性实验,受试动物均未出现过敏与刺激反应,证明rhGM-CSF喷雾剂外用是安全的。4.完成了rhGM-CSF喷雾剂对烧伤、烫伤、皮肤溃疡及口腔溃疡的药效研究。使用不同浓度的喷雾剂对家兔浅Ⅱ度烧伤模型、家兔浅Ⅱ度烫伤模型、豚鼠皮肤溃疡模型和小鼠口腔溃疡模型给药,结果表明rhGM-CSF喷雾剂组对烧伤、烫伤、皮肤溃疡及口腔溃疡等适应症均有明显的治疗作用。通过以上对rhGM-CSF喷雾剂的处方筛选、制备工艺、质量标准、毒理及药效学等临床前研究,为进一步进行rhGM-CSF喷雾剂临床研究提供了重要的前期工作基础。