鸭疫里默氏菌（Riemerella anatipestifer,RA）是一种革兰阴性菌主要感染鸭等多种禽类,给养鸭业带来巨大的经济损失。本研究解析铁摄取调节子—Fur在鸭疫里默氏菌中所具备的功能,并评价该缺失株作为基因缺失弱毒苗的潜力,主要结果如下:1.fur基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备首先根据RA CH-1基因组上的fur基因序列将其扩增并克隆于表达载体p ET32a上;随后将重组质粒导入表达菌E.coli Rosetta中进行原核表达;然后利用His-tag亲和层析试剂纯化C端带有6个组氨酸标签的重组蛋白Fur6His;最后用纯化后的重组蛋白Fur6His免疫昆明鼠,收集血清,获得对应的鼠源多克隆抗体。2.fur缺失株与回补株的构建基于同源重组的原理,设计融合PCR引物扩增fur基因左右同源臂以及壮观霉素抗性基因,随后三者通过融合PCR进行连接。然后利用自然转化的方法将融合片段导入RA CH-1并用壮观霉素抗性板筛选出缺失株RA CH-1Δfur。其次将fur基因克隆于穿梭质粒pLMF03,并通过自然转化的方式将重组质粒导入缺失株,构建回补株RA CH-1Δfur pLMF03::fur。最后利用q PCR验证缺失株没有极效应,利用Western-blot检测回补株fur基因能正常表达,确保缺失株与回补株构建成功。3.fur基因的功能研究RA CH-1的Fur能抑制铁摄取基因B739＿0103与B739＿0173的转录,能直接结合B739＿0173的启动子,此外H2O2能钝化该Fur的调节能力。在fur缺失后缺失株出现生长受损,胞内铁浓度高于野生株,H2O2敏感性和胞内活性氧出现上升的现象,说明Fur对鸭疫里默氏菌的铁离子动态平衡,细菌生长以及氧化剂耐受至关重要。最后测定RA CH-1Δfur的毒力下降超过10~4倍,定殖能力也出现明显降低。4.RA CH-1Δfur缺失株作为候选弱毒疫苗株的评价首先评估弱毒株RA CH-1Δfur的免疫安全性,结果显示弱毒株未对雏鸭的健康造成影响并且雏鸭在免疫96 h后将弱毒株从体内清除,说明弱毒株RA CH-1Δfur具有较高的安全性。其次检测弱毒株的免疫保护力,结果表明免疫弱毒株的雏鸭在接受高剂量的野生株攻击后,雏鸭显示出100%的抵抗力,雏鸭生长状态与身体状况也未受影响并且还能更快的清除体内的野生株,说明弱毒株RA CH-1Δfur具有较高的免I疫保护力。最后,检测了弱毒株免疫后雏鸭的细胞免疫与体液免疫水平,结果表明免疫弱毒株RA CH-1Δfur不会造成雏鸭的细胞因子紊乱,此外雏鸭体内还产生了高水平的特异性抗体。总体而言,RA CH-1Δfur做为弱毒活疫苗具有较高的潜力。