论文部分内容阅读
研究背景:糖尿病视网膜病变(Diabetic Retinopathy,DR)是指由于糖尿病导致的长期新陈代谢改变对视网膜微血管造成损害而引起的眼底病变,是最常见的糖尿病并发症,也是工作人群的主要致盲因素。血管通透性增高导致血管渗漏是糖尿病视网膜病变的主要病症,视网膜血管的增生是增殖性糖尿病视网膜病变的特征。促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)是一个多功能因子,除了可以促红细胞的生成外,还可以诱导血管增生和保护神经细胞,并在糖尿病视网膜病变眼球中高表达。关于EPO在糖尿病视网膜病变中,究竟是保护因子还是致病因子存在争议。研究方法:(1)抽取57位无视网膜的糖尿病患者和58位糖尿病视网膜病变患者的外周血样,用ELISA检测血清样本中的EPO蛋白含量。(2)利用细胞血管形成实验,Matrigel胶模拟基底膜,用不同浓度的EPO蛋白刺激HRMEC细胞,无EPO蛋白刺激的HRMEC细胞为对照组,形成的管腔成像经AngioTool软件定量分析,用血管密度为定量对实验组和对照组的结果进行对比。(3)首先通过RT-PCR和WB来检测EPO受体EPOR和CD131在HRMEC细胞内mRNA和蛋白水平表达,然后构建RNAi慢病毒载体来沉默HRMEC细胞内的EPOR和CD131基因,通过Q-PCR来判定沉默效果之后,再次用细胞血管形成实验来观察沉默EPOR和CD131基因的HRMEC细胞的管腔形成效果。研究结果:(1)ELISA的结果显示,糖尿病视网膜病变患者血清中EPO蛋白的水平显著高于无视网膜病变的糖尿病患者,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)HRMEC细胞血管形成实验结果显示,无EPO蛋白刺激的HRMEC细胞的血管密度为23.39811,在500ng/ml和1000ng/ml EPO蛋白浓度的刺激下,HRMEC细胞的血管密度分别为38.66325和38.5157,血管形成效果明显高于对照组。(3)RT-PCR和WB的结果表明,HRMEC细胞上有EPOR和CD131的表达;Q-PCR的结果表明,EPOR和CD131在HRMEC细胞中的基因表达量减半,EPOR和CD131基因被慢病毒有效沉默;细胞血管形成实验结果显示,沉默CD131基因的HRMEC细胞形成的血管密度为40.32122,沉默EPOR基因的HRMEC细胞形成的血管密度为30.74917,正常HRMEC细胞形成的血管密度为60.53738。经慢病毒沉默EPOR和CD131的HRMEC细胞的成管效果明显低于正常的HRMEC细胞。研究结论:EPO蛋白是糖尿病视网膜病变患者的相关因子,并可能通过EPO受体EPOR和CD131来调控糖尿病视网膜病变中的血管增生。HRMEC细胞可以作为体外细胞模型来研究EPO在糖尿病视网膜病变的作用。