黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)是目前已知霉菌中毒性最强的物质。AFB1不仅能引起急性中毒和慢性中毒,还有致癌、致畸、致突变的三致作用,严重危害人类和各种动物的健康。一直以来关于真菌的产毒机理、毒素的致毒机理已有大量研究,但由于该毒素是小分子化合物,针对该毒素如何被动物细胞吸收的机理研究很少。本研究设计了一种以固相亲和层析技术为基础筛选AFB1结合蛋白的方法,并对筛选出的蛋白进行分析验证。该方法首先制备了AFB1偶联蛋白复合物(AFB1-BSA),然后将AFB1-BSA与小鼠的总蛋白孵育、经非特异性洗涤和特异性洗脱、SDS-PAGE分析、质谱分析鉴定等步骤,一共得到雌二醇β脱氢酶5(Akr1c6)、果糖二磷酸醛缩酶B(ALDOB)、40S核糖体蛋白A(Rpsa)等8个可能的AFB1结合蛋白。在进一步的生物信息学分析后,本研究进一步分析验证Akr1c6和Rpsa蛋白与AFB1的相互作用。其中,Rpsa蛋白是层粘连蛋白、阮病毒、细菌等的膜结合蛋白。随后,本研究成功克隆出rpsa和akr1c6两个基因,将基因分别构建到原核表达载体pET28a上并转化到E.coli BL21(DE3)宿主菌中,然后通过IPTG诱导蛋白的表达和Ni柱进行纯化。本研究中通过酶联免疫分析法,以AFB1-BSA包被96孔板,分别和纯化的Rpsa和Akr1c6蛋白孵育后,用抗HIS抗体检测,证实了 Rpsa和Akr1c6蛋白与AFB1间确实存在体外结合作用。本研究还通过荧光共定位的方法,我们在细胞水平上观察Rpsa与AFB1是否存在作用关系;结果发现,在HELA细胞中,二者存在共定位现象,即Rpsa蛋白和AFB1存在着基于细胞类型的相互作用。本研究还利用纯化的Rpsa和Akrlc6蛋白对Balb/c小鼠进行皮下多点注射,成功制备了 Rpsa和Akr1c6蛋白的多克隆抗体,为进一步的细胞水平上的蛋白功能研究打下了基础。本研究筛选并验证了两个AFB1的结合蛋白:Rpsa和Akr1c6。目前正进行细胞内它们与AFB1的吸收和分布等相关生物学功能的进一步分析,以期能为AF1如何进入动物细胞的研究打下基础。