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Cell-in-cell是指一个或多个结构和功能上完整的活细胞存在于另一个细胞胞浆内部,形成的细胞套细胞的现象。Cell-in-cell结构在体内常见于多种同质肿瘤细胞间,且与肿瘤的临床转归密切相关。近年来,染色体异常被认为是肿瘤的启动因素之一,染色体9p21大片段缺失是临床上常见的染色体异常,研究发现,大约有1/3种人类肿瘤中存在9p21染色体缺失、点突变或启动子甲基化,其中包括间皮瘤、黑色素瘤、神经胶质瘤、肺癌、乳腺癌等。CDKN2A是位于染色体9p21区的关键肿瘤抑制基因,编码两个重要的细胞周期抑制蛋白p16INK4a和p14ARF。有报道指出CDKN2A基因的缺失与肿瘤发生发展密切相关。有趣的是,有文献报道在9p21纯合子(CDKN2A/p16)缺失的间皮瘤细胞中发现大量的cell-in-cell结构,而该结构在9p21染色体正常的间皮细胞中极少出现,提示CDKN2A基因功能性缺失可能是诱导cell-in-cell形成的关键基因之一。因此,我们拟通过实验研究CDKN2A基因与cell-in-cell结构形成之间的关系,并进一步探究CDKN2A基因影响同质肿瘤细胞cell-in-cell结构形成的分子和细胞学机制。本研究中,我们首先选用CDKN2A基因功能性缺失的细胞系MCF7,构建CDKN2A(p16INK4a和p14ARF)表达载体和稳定表达细胞系,我们发现重新表达CDKN2A基因的MCF7细胞体积增大,轮廓线延长,且增殖受到抑制,更为重要的是CDKN2A基因的表达能显著抑制MCF7细胞间同质cell-in-cell结构的形成。而通过CRISPR/Cas9方法敲低CDKN2A能促进HEK293细胞cell-in-cell结构的形成。进一步研究显示细胞内过表达CDKN2A基因显著抑制了肌球蛋白轻链MLC的磷酸化水平(p-MLC),而通过免疫荧光染色分析发现,过表达CDKN2A会引起E-cadherin募集到胞内囊泡膜上导致细胞间连接弱化,细胞内微丝F-actin向细胞边缘分布增加。所以我们认为CDKN2A基因可能通过诱导细胞内F-actin重新分布,抑制p-MLC和细胞间连接形成,从而抑制同质cell-in-cell结构形成。因此,肿瘤细胞中CDKN2A基因的表达缺失可能是控制肿瘤细胞形成同质cell-in-cell结构的关键开关之一,对于其调节机制的研究将为探究cell-in-cell结构形成的始发因素提供新的切入点。