【摘 要】
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目的:观察内毒素(LPS)刺激退变人椎间盘髓核细胞前后,核因子kappB(NF-κB)的活化与细胞凋亡的相互关系。方法:体外培养退变的人椎间盘髓核细胞,采用CCK-8法测定LPS在不同浓度
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目的:观察内毒素(LPS)刺激退变人椎间盘髓核细胞前后,核因子kappB(NF-κB)的活化与细胞凋亡的相互关系。方法:体外培养退变的人椎间盘髓核细胞,采用CCK-8法测定LPS在不同浓度下(100、200、500和1 000μg/mL)对髓核细胞增殖影响,并筛选合适的刺激浓度;设立空白对照组,单纯LPS(500μg/mL)刺激组,NF-κB抑制剂(BAY11-7082)+LPS(500μg/mL)刺激组,以Hochest33258染色以及AnnexinV-PI双标法检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3、PARP、NF-κB结合蛋白P65以及磷酸化P-P65的表达。结果:CCK-8实验结果显示当LPS浓度为500μg/mL能明显降低细胞的活力。与空白对照组相比,单纯LPS刺激组细胞凋亡率上升(p<0.05),P-P65表达明显增加,其凋亡蛋白活化型caspase 3、PARP降解产物表达也增高(p<0.05)。而与单纯LPS刺激组相比,NF-κB抑制剂+LPS刺激组细胞凋亡率下降(p<0.05),P-P65表达明显降低,其凋亡蛋白活化型caspase-3、PARP降解产物表达也降低(p<0.05)。结论:NF-κB信号通路可能与椎间盘退变时髓核细胞凋亡的发生密切相关,值得进一步研究。
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