甜樱桃PacCYP707A2负调控果实成熟以及SlPti4基因功能分析

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甜樱桃(Prunus avium L. cv. Satonishiki)属于非跃变型果实,其成熟受脱落酸(ABA)的调控,PacCYP707As编码ABA降解途径中关键酶8’羟化酶,本试验通过烟草脆裂病毒诱导的基因沉默(VIGS)鉴定了PacCYP707A2在甜樱桃果实发育过程中的功能。试验结果表明,甜樱桃PacCYP707A2的表达在花后21d较低,随后大幅度上升,在花后25d达到峰值,随着果实成熟不断下调,花后36 d后基本不变。VIGS沉默PacCYP707A2后,果实中PacCYP707A2的表达下调到对照的15%。抑制PacCYP707A2的表达促进了果实的着色和成熟,PacCYP707A2-RNAi果实可溶性固形物,花青苷等成熟相关生理指标含量比对照高,果实硬度比对照低,果实中ABA的水平及PacNCED1的表达上调。PacCYP707A2-RNAi改变了ABA响应基因及成熟相关基因的转录,包括ABA代谢基因NCED和CYP707As,花青素合成基因PacCHS, PacCHI, PacF3H, PacDFR, PacANS, PacUFGT,乙烯生物合成基因PacACO1及转录因子PacMYBA。这些结果表明PacCYP707A2主要通过调控甜樱桃果实成熟过程中ABA的水平对果实成熟进行负调控。SlPti4编码的转录因子属于乙烯响应因子ERF家族,位于乙烯信号转导的下游,为了解SlPti4在番茄(Solanum lycopersicum cv.Tom)中的功能,我们得到了SlPti4-RNAi番茄,试验结果表明,与野生型相比,SlPti4-RNAi果实提前2-3 d成熟,SlPti4-RNAi果实中ABA的提前积累及信号转导相关基因的改变引起乙烯及成熟相关基因表达的变化最终导致果实提前成熟;SlPti4-RNAi植株对干旱更加敏感,在干旱18d处理后SIPti4-RNAi植株80%以上的叶片萎蔫,而野生型中只有30%的叶片萎蔫,SlPti4-RNAi植株中ABA含量及ABA生物合成基因SlNCED1,信号转导相关基因SIPYLs及SlPP2Cs的表达均比野生型低;SlPti4-RNAi种子萌发过程中对ABA不敏感,与野生型相比,SlPti4-RNAi干种子中ABA的水平及SINCED2的表达大幅度下调,种子萌发过程中ABA信号转导相关基因SIPYLs和SlPP2Cs的表达也下调。酵母双杂交试验表明SlPti4直接与ABA受体SlPYL4/7/9互作,调节受体的活性,SlPti4与ABA信号另一核心组分SnRK2.5互作,而SnRK2.5能与下游的转录因子SlABF2, SlABF4及ABI5互作直接传递ABA信号。这些结果表明SlPti4通过改变ABA的代谢及信号转导核心组分参与果实的成熟与发育,植株的抗干旱胁迫及种子的萌发。
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