【摘 要】
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本文在鉴定维甲酸(retinoic acid,RA)诱导人成骨肉瘤MG-63细胞终末分化的基础上,应用选择性抽提、整装透射电镜和蛋白质组学分析技术,对MG-63细胞诱导分化过程中核基质-中间
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本文在鉴定维甲酸(retinoic acid,RA)诱导人成骨肉瘤MG-63细胞终末分化的基础上,应用选择性抽提、整装透射电镜和蛋白质组学分析技术,对MG-63细胞诱导分化过程中核基质-中间纤维系统的构型变化和核基质蛋白组成的变化进行系统研究。分析鉴定与肿瘤增殖分化相关的特异核基质蛋白,并探索它们在肿瘤细胞诱导分化过程中的调控作用,以期能够在较为整体的水平上进一步认识细胞癌变与逆转机理,从而找出细胞增殖与分化调控研究的新方向。实验结果显示,经1μmol/L RA处理之后,人成骨肉瘤MG-63细胞的增殖受到了明显抑制,发生了G0/G1期阻滞,细胞形态改变的同时伴随着癌基因c-myc、c-fos的表达下调和抑癌基因Rb、p27的上调表达。并且RA能够促进MG-63细胞Ⅰ型胶原、骨钙蛋白、骨粘素和骨结节等骨特异性标志物的表达和形成。选择性抽提整装透射电镜观察显示经RA处理后MG-63细胞的核基质-中间纤维系统构型发生了恢复性变化,由肿瘤细胞核基质不规则聚积的纤维结构转变为层次分明、精细发达的网状结构。双向凝胶电泳分析显示在RA诱导MG-63细胞分化前后存在43个差异表达的核基质蛋白,经质谱分析,鉴定了其中的25个蛋白。其中在分化的MG-63细胞中表达下调的蛋白鉴定为热休克蛋白HSP70,Cyclin折叠蛋白1,actin,14号染色体ORF10编码的蛋白,转录延伸因子A,nucleophosmin蛋白,hnRNP A2/B1和prohibitin;表达上调和新出现的蛋白质为锌指蛋白ZNF710,ZYG11B蛋白,孤儿核受体NR1D2,RAS家族RAB3D蛋白,Rb结合蛋白RBBP7,vimentin,泛素化水解酶UCH interacting protein,MHCⅠ类抗原,类CDK蛋白3,免疫球蛋白超家族成员DORA蛋白和泛素相关蛋白sentrin家族成员SUMO-4。其中除vimentin,actin,HSP70,nucleophosmin和RBBP7外,均属首次在核基质中
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