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[目的]通过研究钙库操纵型钙通道中TRPC、ORAI1通道和相关钙离子调控分子NCX在血管平滑肌细胞、血管内皮细胞中表达的差异,试找出只抑制血管平滑肌细胞增殖而不影响血管内皮细胞增殖的关键分子,为实现缩短PCI术后双联抗血小板药物治疗时间提供新的理论依据。[方法]1、通过实时荧光定量PCR检测TRPC家族TRPC1、TRPC3、TRPC4、TRPC5和TRPC6、ORAI1、NCX家族NCX1和NCX2在血管平滑肌细胞与血管内皮细胞中的转录水平的差异。2、进一步通过Western Blot验证上述基因在血管平滑肌细胞和血管内皮细胞中表达水平的差异。3、将Western Blot检测中表达差异显著的基因挑选出来通过慢病毒转染过表达和siRNA干扰技术建立高表达和低表达目标基因的细胞系,并通过荧光显微镜观察和荧光定量qPCR、Western Blot鉴定。4、CCK8增殖实验检测过表达和干扰目标基因后对血管平滑肌细胞以及血管内皮细胞增殖速率的影响。[结果]1、qPCR检测结果为:trpc1、trpc6、ncx1和orai1在内皮细胞中转录水平高于平滑肌细胞,而trpc3、trpc4、trpc5和ncx2在内皮细胞中转录水平低于平滑肌细胞,上述实验结果均通过统计学分析,P<0.01,差异显著,具有统计学意义。2、Western Blot检测结果为:TRPC6、ORAI1在内皮细胞中蛋白表达水平显著高于平滑肌细胞,该实验结果与qPCR实验结果一致;TRPC4、TRPC5在内皮细胞中蛋白表达水平显著低于平滑肌细胞,该实验结果也与qPCR实验结果一致;而TRPC1、TRPC3、NCX1、NCX2在内皮细胞和平滑肌细胞中蛋白表达水平差异不显著,P>0.05,无统计学意义。3、慢病毒转染建立SMC-orai1和EC-orai1过表达稳转细胞系,荧光显微镜观察可见转染阳性率分别为90%和80%,并通过WB检测过表达细胞系SMC-orai1和EC-orai1中orai1蛋白表达水平可见SMC和EC细胞中orai1蛋白表达量均明显上调,P<0.05,差异显著,有统计学意义。4、转染TRPC4 siRNA和TRPC5 siRNA至EC细胞和SMC细胞,经荧光显微镜下观察转染后的EC和SMC细胞,siRNA trpc4和siRNA trpc5转染阳性率在EC细胞中为90%和90%;而siRNA trpc4和siRNA trpc5转染阳性率在SMC细胞中为95%和95%。通过WB检测干扰后的HCAEC和HCASMC细胞的TRPC4和TRPC5的蛋白表达水平较空白组和NC组明显降低,P<0.01,差异显著,有统计学意义。5、CCK8实验结果为:过表达ORAI1蛋白后SMC细胞增殖速率较对照组明显增高,P<0.05,差异显著,具有统计学意义;而过表达ORAI1蛋白后EC细胞增殖速率与对照组相比差异不显著,P>0.05,无统计学意义。使用siRNA单独干扰TRPC4或TRPC5在SMC细胞中的表达后细胞增殖速率略下降,但差异不显著,P>0.05,不具有统计学意义,但同时干扰TRPC4和TRPC5在SMC细胞中的表达后,SMC细胞的增殖速率明显下降,差异显著,P<0.05,具有统计学意义;而在EC细胞中不论单独干扰TRPC 4或TRPC 5还是联合干扰TRPC 4和TRPC 5其细胞增殖速率均不受明显影响。[结论]1、EC细胞和SMC细胞中TRPC 4、TRPC 5、TRPC 6和ORAI1在转录水平和蛋白表达水平上均具有显著差异,而TRPC1、TRPC3、NCX1、NCX2仅在转录水平有差异。2、过表达ORAI1可以促进SMC细胞的增殖而不影响EC细胞的增殖能力。3、共同抑制TRPC4和TRPC5的表达可以只抑制SMC细胞的增殖而不影响EC细胞的增殖能力。4、ORAI1、TRPC4、TRPC5是调控血管内皮细胞和血管平滑肌细胞的增殖速率的重要靶点。5、通过抑制TRPC4、TRPC5这两个基因靶点为实现缩短PCI术后双联抗血小板药物治疗时间提供新的理论依据。