拟南芥钙/钙调素信号对WRKY53调控叶片衰老功能的影响

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钙信号是植物信号转导网络的核心成员,钙调素(Calmodulin,CaM)是重要的钙信号转导者之一,通过结合靶蛋白将钙信号传导至下游事件,从而调节植物的生长发育和逆境响应。WRKY53含有一个钙调素结合结构域,研究已表明WRKY53与CaM之间存在互作。拟南芥WRKY53是叶片衰老重要的调控因子,目前关于WRKY53在叶片衰老过程中的功能及其参与的调控网络已有很多报道,但WRKY53作为一个CaM结合蛋白,其功能是否受到Ca2+/CaM信号的调节,仍未见报道。本实验以模式植物拟南芥为研究对象,对Ca2+/CaM信号与WRKY53叶片衰老调控功能的关系展开研究,以期了解 Ca2+/CaM信号通过WRKY53调节叶片衰老的作用机理,扩大我们对Ca2+/CaM调控网络和叶片衰老调控机制的认识。  本研究主要内容包括:⑴对AtWRKY53钙调素结合位点(CaMBD)进行三种突变,目的是不改变(mutation1,M1)、减弱(M2)或阻止(M3)WRKY53与CaM的结合能力。成功构建了WRKY53超表达载体和CaMBD突变型WRKY53(WRKY53-M1、WRKY53-M2、WRKY53-M3)的超表达载体。⑵通过农杆菌蘸花侵染的方法转化拟南芥,都获得了阳性转基因植物,并且筛选到了T3代纯合株系。通过定量RT-PCR分析转基因株系中目的基因的表达量,发现目的基因均超量表达。⑶对超表达株系的叶片衰老表型进行分析,发现 WRKY53超表达株系(WK53-OX)、WRKY53-M1超表达株系(WK53-M1-OX)和WK53-M2-OX叶片衰老均比WT更早发生,其中WK53-OX和WK53-M1-OX叶片衰老非常明显,而WK53-M3-OX叶片衰老表型与WT相似。⑷通过定量RT-PCR,分析了WT、wrky53、WK53-OX、WK53-M1-OX、WK53-M2-OX和WK53-M3-OX材料中WRKY53下游所调控的与衰老相关的基因如 WRKY62、SAG12、CAT2和CAT3的表达。发现相比 WK53-OX和WK53-M1-OX,WK53-M2-OX和WK53-M3-OX中这些基因的表达量都明显减少,说明阻止CaM与WRKY53的结合可能影响了WRKY53对下游基因的调控。以上结果说明CaM的结合在WRKY53调控叶片衰老中有重要作用。
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