【摘 要】
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目的:1型糖尿病（Type 1 diabetes,T1D）是由自身免疫反应导致的胰岛β细胞分泌胰岛素不足引起的。虽然补充外源性胰岛素可以有效缓解糖尿病及其并发症,但这并不能恢复受损的胰岛β细胞。SRY相关高迁移群盒基因9（SRY-related high mobility group-box gene 9,Sox9）是胰腺祖细胞的标志性分子,在调节胰腺发育中发挥重要作用。本研究旨在探讨Sox9在胰
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目的:1型糖尿病（Type 1 diabetes,T1D）是由自身免疫反应导致的胰岛β细胞分泌胰岛素不足引起的。虽然补充外源性胰岛素可以有效缓解糖尿病及其并发症,但这并不能恢复受损的胰岛β细胞。SRY相关高迁移群盒基因9（SRY-related high mobility group-box gene 9,Sox9）是胰腺祖细胞的标志性分子,在调节胰腺发育中发挥重要作用。本研究旨在探讨Sox9在胰岛β细胞损伤-修复中的表达特性及调控作用。方法:1.SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）后,在第0、2、5、8和14天检测大鼠血糖;在注射STZ后第0、8和14天收集胰腺进行HE染色,并通过免疫组织化学染色检测胰岛素在胰岛的表达;收集对照组的大鼠与注射STZ后第14天大鼠的胰岛与胰腺,经Western blot和Real time-PCR检测胰岛中Sox9的表达,免疫荧光双标法检测Sox9在胰岛β细胞的表达。2.RIN-m5F细胞转染Lv-EGFP或Lv-r Sox9-EGFP后,经炎性细胞因子（IL-1β和IFN-γ）刺激24小时,显微镜下观察细胞形态,Western blot法检测Bax,Bcl-2,caspase 3和cleaved-caspase 3的表达,Real time-PCR检测Bax,Bcl-2和胰岛素的表达,ELISA检测培养上清中胰岛素含量。3.Sox9flox/flox/Ins2-Cre+（胰岛β细胞特异性敲除Sox9）小鼠与Sox9flox/flox/Ins2-Cre-小鼠分别经STZ诱导胰岛β细胞损伤,14天后进行葡萄糖耐量实验,收集小鼠胰腺进行HE染色并通过免疫荧光检测胰腺中胰岛素的表达,Western blot和Real time-PCR检测胰岛中凋亡相关分子（Bax和Bcl-2）的表达,ELISA法检测血清中胰岛素含量。结果:1.经STZ诱导胰岛β细胞损伤后的大鼠血糖水平呈现出先升后降的趋势,胰岛β细胞数量减少后增多,且在血糖接近恢复时,Sox9在胰岛β细胞中表达升高。2.经炎性细胞因子刺激培养24小时后,相对于转染Lv-EGFP的RIN-m5F细胞来说,过表达Sox9的RIN-m5F细胞形成较少的细胞突起,Bax和cleaved-caspase3表达较少,Bcl-2表达相对较高,且胰岛素分泌水平也更高。3.相对于Sox9flox/flox/Ins2-Cre-小鼠,胰岛β细胞特异性敲除Sox9小鼠(Sox9flox/flox/Ins2-Cre+)在STZ诱导损伤后葡萄糖耐受能力降低,胰岛β细胞数量更少且凋亡更加明显,胰岛素分泌严重不足。结论:本研究在发现胰岛β细胞损伤后修复时高表达Sox9的基础上,进一步阐明过表达Sox9能抑制炎性因子诱导的胰岛β细胞损伤和胰岛素分泌紊乱,此外,在胰岛β细胞敲除Sox9基因导致其损伤不能及时修复。以上结果表明,Sox9在胰岛β细胞损伤-修复中发挥重要的调节作用。
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