鸡传染性支气管炎病毒RT-PCR和RT-LAMP检测方法的建立

被引量 : 0次 | 上传用户:xxn1954
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis, IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus, IBV)所引起的一种急性、高度接触性的动物传染病。IB主要损害鸡的呼吸系统、消化系统和生殖系统,引起呼吸困难、肾脏病变和产蛋下降等症状,并且发病率和死亡率较高,严重影响着鸡养殖业的健康发展。为建立IBV的快速检测方法,本研究在IBV基因序列的分子生物学信息收集与分析的基础上,进行引物设计,分别对IBV的RT-PCR和RT-LAMP检测方法进行了研究,为IBV感染的临床诊断提供了可靠的检测技术手段。根据GenBank已发表IBV的M基因的序列,设计合成2条引物,通过IBV-pMD19-T重组质粒的构建、反应条件的优化、以及检测方法的敏感性试验和特异性试验,建立了IBV的RT-PCR检测方法,并在临床检测中进行了初步应用。结果显示:建立的RT-PCR可扩增出271bp大小的特异性目的基因片段,具有良好的特异性和敏感性。其敏感性可达到60个拷贝的目的基因片段,MDV、NDV、支原体等常见病原核酸扩增均为阴性。对于25份临床样品的检测结果表明4份为IBV核酸阳性,阳性率达16%。根据IBV的M基因设计合成6条引物,通过反应条件的优化、敏感性试验和特异性试验,对IBV的RT-LAMP检测方法进行了初步研究。结果建立的RT-LAMP检测方法在63℃,45min条件下,扩增产物的琼脂糖核酸凝胶电泳显示大于160bp的特异性梯带状目的基因条带,其检测极限比建立的RT-PCR更高,可达到6个拷贝的目的基因片段,MDV、NDV、原体等常见病原核酸扩增均为阴性,具有良好的特异性和敏感性。
其他文献
第一部分:中孕期胎儿的透明隔腔的超声基础测量目的:对中孕期胎儿透明隔腔进行超声基础测量,包括中孕期内透明隔腔的正常值范围及透明隔腔与孕周、双顶径、头围、小脑横径间的
多热源环状管网供热相比较于传统形式的供热管网,具有诸多的优势。随着集中供热系统的发展,它已经成为了一个新的发展趋势。但是由于缺乏与之相应的设计、施工、管理、调节等
目的定量综合分析母亲孕期补充叶酸与其子女孤独症谱系障碍(ASD)发病风险的相关性。方法计算机全面检索PubMed、Embase、Scopus、Corchrane Liabrary、EBSCO、中国知网、万方、
针对什么是地方政府债务风险,本文将其归纳为形成危害预期的债务超常规增长,通过相关文献分析,指出经济发展、财政体制、管理制度和政府行为等虽然促进了地方政府债务增长,但
水电站是我国水力发电必不可少的一部分。水电站中,变压器是重要的组成设备。变压器的主要作用是负责原始电能的升压和降压的处理,使电压或是电流值处于安全的用电范围。但是
“精准扶贫是十三五时期的头等大事和第一民生工程,是全面建成小康社会的底线任务和关键一步。”(1)新时期,我国的扶贫开发工作更加强调精准性,目标也更为明确、更加具体,如何
价值观教育是素质教育对初中历史教学提出的更高要求,促使价值观教育内容在初中历史教学中的渗透更受关注,有助于学生良好价值观念形成与健康品格的养成。本文从初中历史教学
目前常用的焊缝跟踪方法在实际应用中的效果还不尽人意,系统复杂且价格昂贵,适合场合有限,缺乏一种低成本、高精度的焊缝跟踪方法,磁控电弧传感焊缝智能跟踪方法作为一种满足这种
随着经济与文化日新月异的发展,人们的生活节奏不断加速,负担加重,而城市景观常常是人们工作之余,缓解压力,享受片刻宁静与悠闲生活的最好场所,于是,现代城市景观建设日益为