对A431经典自噬水平的初步研究

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目的:探讨经典自噬诱导剂雷帕霉素和饥饿处理对 A431细胞自噬水平的影响。方法分别将A431细胞和HeLa细胞设置为对照组、DMSO组、20nM雷帕霉素组、80nM雷帕霉素组、EBSS组。免疫印迹法(Western Blotting)检测A431细胞和HeLa细胞自噬相关蛋白LC3A/B、GAPDH、GABARAP的表达水平。吖啶橙(acridine orange, AO)染色观察不同处理后A431细胞、HeLa细胞自噬体表达水平。  结果:western blot结果显示HeLa细胞的对照组与DMSO组中LC3II/LC3I的比值相一致,无统计学意义(P>0.05);20nM雷帕霉素、80nM雷帕霉素、EBSS的LC3II/LC3I比值比较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。A431细胞的对照组与 DMSO组中 LC3II/LC3I的比值无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05);20nM雷帕霉素、80nM雷帕霉素、EBSS的LC3II/LC3I比值跟对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。通过SPSS将HeLa、A431细胞的GABARAP、LC3I和LC3II进行双变量的相关性分析。结果显示HeLa细胞的LC3I型与GABARAP的pearson相关性为0.669,说明LC3I和GABARAP为正相关。LC3II型与GABARAP的pearson相关性为-0.742,说明负相关。A431细胞LC3I型与GABARAP的pearson相关性为0.837,说明LC3I和GABARAP为正相关。LC3II型与GABARAP的pearson相关性为-0.184,说明负相关。HeLa细胞吖啶橙染色后在显微镜下观察,可见雷帕霉素组(33.307%±0.715%)跟对照组(14.117%±0.295%)相比自噬阳性细胞率明显增高(P<0.05);EBSS组(66.097%±1.141%)跟对照组相比,自噬阳性细胞率明显增高(P<0.05)。A431细胞雷帕霉素组(23.750%±0.260%)与对照组(15.987%±0.242%)比较,自噬阳性细胞率明显增高(P<0.05);EBSS组(32.450%±0.488%)跟对照组比较,自噬阳性细胞率同样增高(P<0.05)。  结论:经典自噬诱导剂雷帕霉素和饥饿能够上调A431细胞的自噬水平,通过相关性分析GABARAP蛋白可能与LC3高度相关。
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