目的:牙根吸收是正畸治疗过程中常见的并发症,而IL-17可能通过牙周膜参与介导破骨细胞的分化和活化从而引发牙根吸收。本实验拟探讨IL-17对HPDLF生物学行为的影响,检测不同浓度不同时间IL-17作用下,HPDLF中RANKL和OPG表达的影响,以及共培养体系下,观察破骨样细胞的形态与功能,探讨IL-17在正畸牙根吸收中可能的作用及其作用机制。方法:1.采用组织块培养法培养牙周膜组织,倒置显微镜观察细胞生长状态,采用免疫细胞化学(Immunocytochemistry,ICC)SP法对培养的细胞进行来源鉴定,建立HPDLF细胞系,并采用噻唑兰比色法(MTT)绘制HPDLF生长曲线;2.取第3-6代生长良好的HPDLF,接种于96孔板,分别加入己经配制的含IL-17浓度为0、5、10、20、40、60、80ng/ml的DMEM培养基作用24h,MTT法检测IL-17对HPDLF增殖活性的影响;3.以浓度为0、5、10、20、40ng/ml的IL-17分别作用于HPDLF24h,以及20ng/ml的IL-17作用于HPDLF0、12、24、48、72h,采用RT-PCR和ELISA法检测成纤维细胞RANKL、OPGmRNA和蛋白的表达水平;4.以Ong/ml、20ng/ml的IL-17作用于成纤维细胞后,和外周血单核细胞共培养14d,TRAP染色观察和计数破骨样细胞的形态、数目。结果:1.所培养细胞为长梭形,呈放射状或漩涡状生长,生长状态稳定,经细胞来源鉴定为中胚层来源细胞,结合取材部位可鉴定为HPDLF。HPDLF生长曲线呈“S”形,从接种第2天开始,细胞进入对数生长期,第6天细胞增殖速度变缓进入平台期;2.MTT结果显示:IL-17作用HPDLF24h后,除在80ng/ml组的OD值小于对照组外,其余各组的OD值均大于对照组(P<0.05),其中,以40ng/ml组的OD值最大(P<0.05);3.经RT-PCR及ELISA检测,与对照组相比,IL-17作用于HPDLF后,可上调RANKLmRNA和蛋白的表达,下调OPGmRNA和蛋白的表达,其中,以20ng/ml组和48h组的表达变化量最明显,组间差别有统计学意义(P<0.05);4.在共培养体系下,单核细胞能生成TRAP阳性多核细胞,IL-17(+)组与IL-17(-)组的TRAP阳性多核细胞数目相比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:1.采用组织块培养法,成功地建立了人牙周膜成纤维细胞模型,生物学性状稳定;适宜浓度的IL-17对HPDLF增殖活性有促进作用,但浓度过大时能抑制HPDLF增殖。2.IL-17能促进HPDLF对RANKL的表达和下调OPG的表达。3.在与人牙周膜成纤维细胞直接共培养的前提下,人外周血单个核细胞可分化为TRAP阳性的破骨样细胞。4.IL-17有促进破骨样细胞生成的作用,其作用机制可能是通过人牙周膜成纤维细胞间接作用于人外周血单个核细胞。