新疆是我国的牧业大省,每年因幼畜腹泻造成的巨大的经济损失。长期以来,解决腹泻的主要办法就是药物治疗,但是,由于抗生素的不合理使用,使得动物耐药性增加。药物治疗的效果已不再理想,成为困扰养殖业的难题之一。因此,疫苗预防将是控制幼畜腹泻的发展趋势。引起动物幼畜腹泻主要原因是由于产肠毒素性大肠埃希氏菌(Enterotoxigenic E.coli, ETEC)和轮状病毒(Rotavirus,RV)感染引起的。在RV病毒的防治中,轮状病毒外壳蛋白VP4和VP7是主要保护性抗原,对疫苗研究具有重要作用。ETEC的致病因子包括黏附素(adhesin)和肠毒素(enterotoxin),黏附素本身无毒,但是它可以与肠上皮细胞特异性受体结合,是实现ETEC的致病前提,ETEC定居后产生的肠毒素对肠上皮细胞具有毒性作用,从而引起细胞代谢紊乱,最终导致幼畜腹泻。因此针对于黏附素和肠毒素的疫苗,是当前ETEC重组疫苗研究的主要热点。利用转基因技术构建植物生物反应器,生产口服疫苗是目前新兴的研究领域。与其他疫苗生产方式相比,转基因植物口服疫苗生产技术具有高效、经济和简便等特点。根据转基因植物口服疫苗的特点,人和家畜家禽摄食方式的不同,应用转基因植物口服疫苗预防集约化饲养动物传染病的发生和流行,具有更为重要的意义。转基因植物口服疫苗的研究热点逐渐由人的转基因植物口服疫苗向家畜和家禽的转基因植物口服疫苗的方向转移。但目前植物可饲(食)疫苗的研究还处在刚刚起步阶段,还存在许多问题。除需要进一步提高抗原基因在植物中的表达量和稳定性以外,还需要解决增强转基因植物可饲(食)疫苗的免疫原性和克服口服耐性问题。添加免疫佐剂是提高免疫反应强度的有效方法,在非植物疫苗中已经被多次证实。对于植物疫苗,在抗原基因转入的同时加入免疫佐剂的基因,使转基因植物在表达抗原蛋白的同时也表达免疫佐剂,应是提高转基因植物口服疫苗免疫反应性的可行策略之一。LT不仅是一种有效的粘膜免疫原,而且也是一种良好的粘膜免疫佐剂。LT与多种非相关的蛋白或非蛋白抗原经不同的免疫途径共免疫,均能明显增强机体针对共服抗原的粘膜sIgA和IgG反应,同时还能消除机体对这些共免疫抗原的耐受,诱发针对它们的长期记忆。本研究首先是克隆了ETEC的黏附素基因K88ac,通过同源性比较,选择在基因的高度可变区,通过TP-PCR技术,将热稳定性肠毒素STII的抗原决定簇(CEHYRQIAKESCKKGF)与K88ac蛋白融合。以大肠杆菌热敏肠毒素LTB作为佐剂,用原核表达的K88ac-STⅡ抗原免疫小鼠能很好地产生针对K88ac-STⅡ的抗体,且能