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角质细胞生长因子（KGF）是成纤维细胞生长因子（FGF）家族的成员之一，又称FGF-7。KGF通过旁分泌方式特异性刺激上皮细胞的生长、分化、迁移，在治疗皮肤创伤、角膜损伤、消化性溃疡及放化疗损伤防护等方面具有诱人的应用前景。但由于其在人体中含量极低，KGF的研究与应用受到很大限制，因此利用基因工程方法制备大量、高活性的KGF，成为研究的重点。本文在原有工作的基础上，对工程菌的诱导表达条件、产物的纯化及生物学活性进行探讨，为建立规模化生产KGF的下游技术提供科学依据。 采用分批培养，对工程菌表达融合蛋白GST-KGF的条件进行研究。结果表明，GST-KGF可溶表达的最佳条件为：诱导温度25℃，诱导物IPTG浓度0.3mmol／L，诱导时菌体密度OD600约为0.97，诱导时间5h。在该诱导条件下，可溶性的融合蛋白GST-KGF表达量约占菌体总蛋白的4.2％，几发酵液可收获25mg左右的GST-KGF。 针对融合蛋白与还原型谷胱苷肽（GSH）和肝素具有特异性的亲和力，我们采用GSH-Sepharose 4B和Heparin-Sepharose CL-6B两种凝胶，运用两步亲和吸附法纯化GST-KGF。利用肝素能够保护KGF使其不受胰蛋白酶降解的特性以胰蛋白酶对吸附在Heparin-Sepharose CL 6B上的融合蛋白进行酶解，切除了融合蛋白的N-端GST部分，最后得到了电泳纯的KGF，其分子量为17KD。1L发酵液可获得5.2mg的KGF，纯化得率为52％。纯化后的KGF经Western Blot检测证实具有KGF抗原性。 在建立小鼠角膜上皮细胞原代培养方法的基础上，我们以小鼠角膜上皮细胞作为靶细胞，采用MTT法对KGF体外促细胞增殖活性进行检测。结果表明，KGF浓度为0.1ng／mL时就显示促细胞增殖作用；当KGF浓度增加到10.0ng／mL时，促增殖作用达最强；但当KGF的浓度达到100.0ng／mL，这种促增殖作用反而减弱。可见，KGF对小鼠角膜上皮细胞有明显地促增殖作用，并与其剂量相关。 采用小鼠烫伤模型对KGF促进伤口愈合作用进行研究。结果表明，用药后，小鼠伤口愈合较快，在伤后的同一时间，用药组的伤口面积小于对照组；小鼠伤口愈合时间从（24.5±1.7）天提前到（21.22±1.2）天。