论文部分内容阅读
本研究主要内容是以人成骨样细胞株OS-732为研究对象,探讨高剂量氟对人成骨细胞凋亡的影响,并进一步研究了氟诱导成骨细胞凋亡的分子机制。
氟化钠可以诱导多种细胞发生凋亡,本研究将探索氟化钠对人成骨样细胞株OS-732细胞凋亡的诱导作用,在此基础上进一步研究氟诱导成骨细胞凋亡的机制.通过MTT法检测证明氟可以显著的抑制成骨细胞的增殖能力.利用Hoechst33342染色、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪等方法检测氟对成骨细胞凋亡的诱导作用,结果显示氟可以诱导成骨细胞细胞核发生变化、产生凋亡小体、DNA片断化、显著提高细胞凋亡率、降低线粒体膜电位.为了探索氟诱导成骨细胞凋亡的发生机制,本研究利用半定量RT-PCR检测氟对凋亡相关蛋白Bcl-2和BaxmRNA水平的影响,并通过westernblot检测氟对抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax和Bak蛋白表达的影响,结果证明氟可以显著提高促凋亡蛋白BaxmRNA水平而抑制抗凋亡蛋白Bcl-2mRNA水平.Westernblot分析结果显示氟可以显著的提高促凋亡蛋白Bax和Bak的表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。通过显色法检测可以得到氟可以显著提高酪氨酸蛋白激酶Caspase-3的活性。
因此,本研究成功建立了氟诱导人成骨样细胞株凋亡模型,并首次对氟诱导成骨细胞株凋亡的机制进行了初步研究,根据现有理论,综合本研究,本文认为,NaF可能至少部分地通过如下的信号传导途径诱导人成骨样细胞株发生凋亡:通过抑制凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达和增强促凋亡蛋白Bax、Bak的表达,导致线粒体膜电位破坏,从而导致线粒体中细胞色素C,Smac等中的一种或者几种凋亡相关蛋白的释放,进行凋亡信号传递,至细胞凋亡的下游执行者Caspase3,从而导致细胞凋亡。