云南蜂胶对四种牙周主要可疑致病菌作用的实验研究

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[目的]通过提取分离云南蜂胶,测定各部位的黄酮类化合物和酚酸的含量。研究蜂胶不同部位对四种牙周主要可疑致病菌的抑制作用,初步寻找蜂胶中的抗菌有效部位,并对其成分进行分析。[方法]1.以95%乙醇为溶剂,采用超声法对蜂胶进行粗提,聚酰胺柱层析法对蜂胶粗提物进行提纯分离得到蜂胶不同部位(FJ-00、FJ-01、FJ-02)。以芦丁和原儿茶酸标准品为对照,采用紫外分光光度法测定蜂胶不同部位的黄酮类化合物含量和酚酸含量。2.厌氧袋法培养牙周主要可疑致病菌Pg、Pi、Fn和Aa标准菌株。采用纸片法比较蜂胶不同部位(FJ-00、FJ-01、FJ-02)对Pg、Pi、Fn和Aa的抑菌效果。设计实验组和对照组,实验组为20%、10%、5%、2.5%、1.25%、0.625%六个浓度的蜂胶不同部位醇溶液,对照组为0.05%甲硝唑液和95%乙醇。3.采用高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱技术对蜂胶中主要抑菌有效部位的化学成分进行初步分析。[结果]1.超声醇提法和聚酰胺柱层析法提取分离得到蜂胶不同部位,经紫外分光光度法测量各部位黄酮类化合物含量分别为:FJ-002.25%、FJ-013.45%、FJ-021.5%。酚酸含量为:FJ-003.6%、FJ-014.8%、FJ-022.8%。2对四种细菌的抑菌研究结果显示,在同一浓度时,FJ-01的抑菌效果比其他两个部位强,差异有统计学意义(P<0.05)。3.采用高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱技术对主要抑菌有效部位FJ-01的化学成分进行了初步研究,结果显示,FJ-01部位中主要的化合物可能有咖啡酸、咖啡酸酯、二氢黄酮类、二氢黄酮醇类和(或)二氢查尔酮类,以及短叶松素的衍生物。[结论]1.超声醇提法和聚酰胺柱层析提取分离得到蜂胶同部位,采用紫外分光光度法测定蜂胶黄酮类化合物和酚酸含量,该方法具有操作相对简便、结果准确等优点。紫外分光光度法测定各部位黄酮类化合物和酚酸含量,黄酮类化合物含量为:FJ-002.25%,FJ-013.45%,FJ-021.5%;酚酸含量为:FJ-003.6%, FJ-014.8%,FJ-022.8%。2.采用聚酰胺柱层析分离得到的蜂胶三个部位对Pg、Pi、Fn、Aa在一定浓度范围内均有抑制作用,对四种细菌的抑制作用呈现出明显的浓度相关关系,在同一浓度时,FJ-01的抑菌效果比FJ-00、FJ-02强。3.对蜂胶有效部位的成分分析结果显示,FJ-01部位中主要的化合物可能有咖啡酸、咖啡酸酯、二氢黄酮类、二氢黄酮醇类和(或)二氢查尔酮类,以及短叶松素的衍生物。
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