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类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种以关节肿胀、滑膜炎症和软骨破坏为特征的自身免疫性疾病，因其发病机理尚未明确，目前缺乏真正有效而副作用小的治疗药物，因此，对RA的发生和发展过程予以系统而合理的解释，并在中医药领域寻找高效低毒控制RA病情的新药是当前研究的重要方向。木瓜是安徽省道地药材，长期以来均被作为祛风湿中药，是中医治疗“痹症”复方用药中的主要成分，大量临床资料提示其对RA有显著疗效。本实验运用化学方法从木瓜中分离提取得到其抗炎镇痛作用和影响免疫功能的有效部位-木瓜苷(glucosides of Chaenomeles speciosa，GCS)；在大鼠佐剂性关节炎(adjuvant arthritis，AA)模型上，探讨GCS对大鼠AA的预防和治疗作用及其作用特点；并从AA大鼠滑膜细胞G蛋白-AC-cAMP信号转导通路的改变探讨GCS的作用机制。 目的 根据大鼠AA的关节局部肿胀、疼痛、多发性关节炎、体重及病理形态学等改变，明确GCS对大鼠AA的预防与治疗作用；从血液流变性、免疫功能等方面，研究GCS对大鼠AA防治作用可能的作用环节；以AA发病的靶细胞—滑膜细胞为突破口，探讨GCS影响AA大鼠关节滑膜细胞具分泌功能细胞器的超微结构与滑膜细胞分泌功能之间的关系；选择AA滑膜细胞的G蛋白-AC-cAMP信号转导为切入点，分析GCS是否通过影响AA大鼠关节滑膜细胞G蛋白-AC-cAMP信号通路而发挥作用? 方法 大鼠足跖皮内注射弗氏完全佐剂(FCA)诱发大鼠AA模型；以GCS 30，60，120mg·kg-1预防给药(ig，d7～d14)和治疗给药(ig，d17～d24)，TGP和阿克他利为阳性对照药。安徽医科大学博士论文 足容积法测量继发侧足肿胀度;进行疼痛评分和多发性关节炎评分;微机化血液流变仪测定血液粘度、毛细玻管法测血凝时间、离心沉淀法测红细胞压积;称重法测定体重、胸腺和脾脏重量;MTT法检测胸腺T淋巴细胞的增殖反应;小鼠活化脾细胞增殖法测定T淋巴细胞产生IL一2水平;小鼠胸腺细胞增殖法测定腹腔巨噬细胞产生IL一1水平;放射性免疫法测定腹腔巨噬细胞中TNF。和PGE:含量。 H型胶原酶和胰蛋白酶消化法、组织块移植法分离培养大鼠的滑膜细胞;光镜、透射电镜分析滑膜细胞内细胞器的形态学改变;MTT法检测滑膜成纤维细胞的增殖反应;小鼠胸腺细胞增殖法及放射性免疫法测定滑膜细胞中IL一1、护p冈F。和PGE:含量;放射性免疫法测定滑膜细胞cAMP水平;RT一PCR电泳检测翎F。mRNA、Gi mRNA、Gs mRNA基因表达水平。结果1.GCS对大鼠AA具有防治作用 应用FCA诱导大鼠AA模型，其继发性反应表现为以多发性关节炎为特征的关节肿胀和触痛、消瘦、活动障碍等类似RA的症状。病理学改变可见滑膜组织充血、水肿、增生;淋巴细胞、单核细胞及少数散在分布的中性粒细胞浸润;血管翁形成;软骨表层组织变性、坏死;软骨破坏、肥大、剥脱或断裂;胶原纤维增生;骨髓腔内骨髓细胞减少，脂肪细胞大量增多。 oes 30，60，一20 mg·kg一，预防给药(19，d7一d 14)和治疗给药(19，d一7一d 24)均可不同程度明显减轻AA大鼠的继发性足肿胀、关节疼痛、多发性关节炎、体重下降等表现;光镜下见关节滑膜组织轻度的滑膜增生、淋巴细胞浸润减少;滑膜下有少量纤维增生、血管豁减轻，其中的新生毛细血管数量减;软骨受损程度减轻，仅见少量炎细胞;骨髓腔中脂肪细胞明显减少、骨髓细胞密集。表明GCS对大鼠AA有防治作用。2.改善血液流变性及免疫功能是GCS防治大鼠AA的重要作用环节 oes 30，60，120 mg·kg一’预防给药(19，d7一d 14)可降低AA大鼠异常升高的全血及血浆粘度、红细胞的聚集性和纤维蛋白原含量;且具有对抗模型大鼠凝安徽医科大学博士论文血时间缩短的作用，表明GCS通过改善AA大鼠血液流变性从而发挥其活血通络治疗法则，体现了GCS治疗AA的整体观。 Gcs60，120 mgkg一‘预防给药(ig，d7一14)恢复AA大鼠胸腺重量，对脾脏重量无明显改变;Ges 30，60，120 mg，kg一，治疗给药(19，d 17祖24)提高AA大鼠胸腺T淋巴细胞的增殖反应能力，但对IL一2水平无显著影响;对AA大鼠腹腔巨噬细胞产生过高的IL一1、TNF。和PGE:水平有抑制作用，表明GCS扶正祛邪，调节AA大鼠免疫功能是其发挥作用的重要途径之一。3.GCS通过改善AA大鼠滑膜细胞的超微结构而抑制其分泌功能 Ges 30，60，220 mg·kg一‘治疗给药(19，d 17一d 24)可纠正AA大鼠关节滑膜细胞具分泌功能的细胞器的形态学异常的超微结构改变:A型滑膜细胞高尔基体结构清晰、完整、轻度卷曲、数量减少，少数线粒体肿胀;B型滑膜细胞粗面内质网略有扩张，但数量减少;A、B型滑膜细胞中间纤维丝、致密体和空泡数量均有所降低。Ges 30，60，120 mg·kg一‘治疗给药(19，d 27一d 24)可降低AA大鼠滑膜细胞TNF。mRNA基因表达，显著抑制AA大鼠滑膜细胞分泌飞NF。;对滑膜细胞分泌IL一1和PGE:水平也有明显影响。 以上结果表明:滑膜细胞是GCS发挥作用的主要靶细胞，其治疗作用与改善滑膜细胞具分泌功能的细胞器的形态学超微结构、抑制滑膜细胞炎性细胞因子基因表达水平和降低滑膜细胞分泌功能密切相关。4.GCS影响AA大鼠滑膜细?