端粒酶RNA基因突变对Hela细胞生长的作用

来源 :浙江理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zlp0234
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
端粒是染色体末端的DNA-蛋白复合物,具有稳定染色体末端的作用。端粒长度的维持和端粒酶活性的激活是大多数癌变过程必须的,端粒相关蛋白及端粒酶RNA的突变都能够导致端粒帽化功能丧失从而导致基因组的不稳定。随着细胞的分裂出现染色体的重组,断裂-融合-桥循环,其中端粒酶可能是最关键的因素之一。端粒酶的概念于20世纪80年代被提出,端粒酶是一个大的核糖核蛋白反转录酶,以自身RNA为模板将端粒重复序列添加到染色体末端维持端粒的长度。端粒酶的必需组件包括反转录酶TERT,端粒酶RNA(TERC)和TERC结合蛋白dyskerin。直到近几年研究才发现端粒酶活性及端粒稳定与恶性肿瘤发生相关。端粒酶在正常人体细胞中检测不到活性,但在85%的人肿瘤细胞中上调,因此成为肿瘤标志物。   本论文以端粒酶RNA亚基为靶标,在端粒酶阳性的肿瘤细胞中引入带突变模板的人端粒酶RNA亚基(MT-hTER)是一种新颖的抑制肿瘤细胞生长的方法。本论文通过构建pcDNA3.1(-)-hTER重组真核表达载体,观察其对人宫颈癌HeLa细胞生长的影响。通过重叠延伸PCR及分子克隆技术构建野生型及突变型hTER表达重组体,将重组体通过脂质体转染HeLa细胞,经药物G418的筛选得到稳定表达外源基因的细胞。RT-PCR检测目的基因的表达,并通过MTT法绘制各组细胞的生长曲线,Hoechst33342染色观察凋亡细胞的形态。   实验结果表明,重组体在细胞内能成功表达目的基因,构建的两个MT-hTER重组体能使HeLa细胞生长速度明显减缓。以上结果提示,在HeLa细胞内表达MT-hTER能抑制细胞的生长速度,并且突变模板的设计可能会影响到抑制效应的发挥。一方面,端粒酶RNA亚基模板区突变,导致突变的端粒重复序列添加到染色体末端,从而影响端粒序列结合蛋白的对端粒DNA的亲和性,使端粒帽化功能丧失,从而出现染色体融合和基因组不稳定,启动细胞周期检验点,导致细胞走向衰老和死亡。另一方面,端粒酶RNA亚基的突变影响了其与hTERT的结合,或是影响端粒酶在细胞内的稳定性,或是端粒酶的延伸方式。   此外,用分子克隆的方法成功构建由hTERT启动子控制的人端粒酶RNA亚基突变的重组腺病毒载体。计划在后期实验中,用构建的载体进行腺病毒的包装,使目的基因仅在端粒酶高表达的肿瘤细胞中表达,从而提高肿瘤基因治疗的特异性。这些研究为深入了解端粒酶的作用机制,为肿瘤的诊断及基因治疗奠定基础。
其他文献
星载激光雷达具有精度高、速度快、穿透性强等优点,广泛应用于极地冰盖高程测量、气溶胶厚度测定以及森林垂直结构探测,全波形数据的引入为星载激光雷达应用于森林树高提取提
矿山开采的对象是矿产资源,如何对矿山开采所造成的沉陷数据进行管理分析,以进一步控制和评价煤炭行业在采掘和加工利用过程中造成的损害,始终是一项艰巨的任务。地理信息系
摘要:在运用垂径定理时,添加辅助线的目的是构造直角三角形,该直角三角形的三条边分别是:半径,弦心距和弦,而在直角三角形中,已知任意两条边长可以求出第三边,也就是说对于圆中的直径、弦长、弦心距和弓形的高四个量来说,已知任意两个量都可以求出其余的量。  关键词:垂直于弦的直径;半径;弦;弦心距;弓形的高;直角三角形;勾股定理  垂径定理不仅是证明线段相等、角相等、弧相等的重要依据,而且还为进行圆的计算
20世纪中叶以来,经济、科技的的高速发展一方面推动了高等教育飞速发展,另一方面也孕育了新的“危机”:入学高峰、经费短缺、师资外流、就业难等等。这些问题对高等教育事业的发