【摘 要】
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相比于化学催化,生物酶催化的反应具有条件温和、耗能低、原料要求低、成品质量高等优点。脂肪酶是一种非常重要的工业用酶,可以在不同的反应体系下催化多种反应,如水解、酯化、
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相比于化学催化,生物酶催化的反应具有条件温和、耗能低、原料要求低、成品质量高等优点。脂肪酶是一种非常重要的工业用酶,可以在不同的反应体系下催化多种反应,如水解、酯化、转酯、醇解及氨解等,因此脂肪酶已经被广泛应用在食品加工、皮革生产、新型生物材料合成、医药、精细化工、去污剂以及造纸等诸多领域。南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)是最具工业应用价值的脂肪酶之一,相比于其它脂肪酶,CALB具有许多优良的特性,如催化活力高、热稳定性好、活性pH范围广、底物不受水溶性影响、在水解和有机合成反应中立体选择性高等。因此,CALB在生物柴油生产、有机合成、手性化合物拆分、制药等领域的应用前景是非常诱人的,但是目前该酶生产成本高昂、分离难度大,工业生产中大规模使用仍然受到严格限制,而通过高效表达系统在体外重组表达CALB是解决这一问题行之有效的办法,关于此方面的研究也一直在持续。毕赤酵母表达系统是近年来发展起来的新型真核表达系统,具有一些其它表达系统不可比拟的优势。本论文分两部分分别探究了CALB全序列以及其成熟肽序列在毕赤酵母GS115中的表达情况。通过分子克隆技术,我们成功构建了带有CALB全序列基因及其成熟肽编码基因的重组质粒pPICZαA-CALB和pPICZαA-m-CALB,并通过电转实现了该重组质粒与毕赤酵母GS115的基因重组,构建了CALB全序列及其成熟肽序列m-CALB的毕赤酵母表达系统GS115-pPICZαA-CALB和GS115-pPICZαA-m-CALB。经过表达条件优化后,我们成功在GS115中表达出了CALB全序列蛋白及其成熟肽序列m-CALB并对其进行了分析与纯化,为以后CALB的高效表达和纯化研究奠定了基础。
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